| 查看: 1100 | 回复: 12 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
克隆测序总是有突变点
|
|||
| 最近做克隆测序，用载体pMD19-T Simple Vector和大肠杆菌JM109，每次测序后有突变点，修复后筛选阳性克隆子，测序有在其他的地方出现突变点，这是什么原因引起的呢，请高手指教，帮忙分析一下。Sample TextSample Text |
回复此楼» 猜你喜欢
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有4人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有8人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有14人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有5人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
-
推荐一本书
已经有12人回复
-
基金申报
已经有4人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
michaelwuqingyu
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 750.1
- 散金: 550
- 红花: 1
- 帖子: 897
- 在线: 49.5小时
- 虫号: 256489
- 注册: 2006-06-03
- 专业: 植物生理与生化
6楼2009-08-11 03:30:58
qgaoamtf
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 13397.4
- 散金: 1937
- 红花: 5
- 帖子: 4119
- 在线: 903.4小时
- 虫号: 447303
- 注册: 2007-10-31
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2009-08-10 21:48:57
xujian568
至尊木虫 (著名写手)
Count XU
- BioEPI: 1
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 10690.8
- 红花: 7
- 帖子: 1316
- 在线: 560.9小时
- 虫号: 336444
- 注册: 2007-04-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-10 22:16
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-10 22:16
|
以前我也碰到过，我那个的缺失影响ORF的，主要在引物的下游一段，而且几次的缺失还是不一样的，后来一怒之下挑了10多个一起去测序，还好有一个是正确的，比较头疼。我当时怀疑：1.模板问题，杂质影响了PCR；2.pcr体系问题，不稳定；3.实验的操作污染;4.pcr仪器不行；5.PCR本身就有千分之零点多的误差允许，就咱碰到了；6.基因中个别碱基本来就是缺失的可能性也是有的。7.测序错误（当时我送的是上海生工）。 楼主再试试，dna/rna提取纯化下，优化一下克隆方法，注意实验的操作，再测一下，应该没有问题。  |
3楼2009-08-10 22:07:38
lihaoexe
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 223.2
- 散金: 227
- 帖子: 162
- 在线: 84小时
- 虫号: 703103
- 注册: 2009-02-17
- 专业: 临床生物化学检验
4楼2009-08-10 22:59:09