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克隆测序总是有突变点
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| 最近做克隆测序，用载体pMD19-T Simple Vector和大肠杆菌JM109，每次测序后有突变点，修复后筛选阳性克隆子，测序有在其他的地方出现突变点，这是什么原因引起的呢，请高手指教，帮忙分析一下。Sample TextSample Text |
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4楼2009-08-10 22:59:09
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2楼2009-08-10 21:48:57
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以前我也碰到过，我那个的缺失影响ORF的，主要在引物的下游一段，而且几次的缺失还是不一样的，后来一怒之下挑了10多个一起去测序，还好有一个是正确的，比较头疼。我当时怀疑：1.模板问题，杂质影响了PCR；2.pcr体系问题，不稳定；3.实验的操作污染;4.pcr仪器不行；5.PCR本身就有千分之零点多的误差允许，就咱碰到了；6.基因中个别碱基本来就是缺失的可能性也是有的。7.测序错误（当时我送的是上海生工）。 楼主再试试，dna/rna提取纯化下，优化一下克隆方法，注意实验的操作，再测一下，应该没有问题。  |
3楼2009-08-10 22:07:38
5楼2009-08-11 02:30:40
