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xu_hai

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【求助】β-actin P不出来,求教原因,急!

我提取的是青鳉鱼的脑组织RNA
实验操作:

1、变性退火反应:
         65℃     5min
         pause
        取出迅速置于冰上
2、反转录反应:
        42℃     30min
        70℃     15min
        4℃        Hold
3、PCR反应
         94℃    2min
         94℃    30s
         55℃    30s
         72℃    1min
        (30个循环)
         72℃    5min
         12℃    Hold
         end

β-actin长度为540bp,电泳后什么都没有,很是郁闷啊,请问哪位大侠能够点拨一下?不甚感激。注:RNA提取应该没有问题。

[ Last edited by xu_hai on 2009-8-11 at 09:20 ]
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112976553

金虫 (小有名气)


xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-14 19:25
LZ还是做个梯度吧。引物退火温度也是文献里面的吧,我也遇到过这样的情况,照文献里P不出来,做一下梯度,立马见效。温度跟文献里描述的差了4~5度
12楼2009-08-13 08:21:20
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yongpwen09

为什么不用常规PCR产物当模板呢


xu_hai(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-11 09:18
为什么不用常规PCR产物当模板呢
2楼2009-08-10 22:39:40
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


xu_hai(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-11 09:18
用别的引物看看你的模板有问题不?如果模板没问题,就可能是 actin引物设计的问题了。
3楼2009-08-11 03:40:22
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xu_hai

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by michaelwuqingyu at 2009-8-11 03:40:
用别的引物看看你的模板有问题不?如果模板没问题,就可能是 actin引物设计的问题了。

引物用的是文献上给的
4楼2009-08-11 20:18:58
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