应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】β-actin P不出来，求教原因，急！
141/2返回列表12下一页
查看: 1070  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xu_hai

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【求助】β-actin P不出来，求教原因，急！

我提取的是青鳉鱼的脑组织RNA
实验操作：

1、变性退火反应：
         65℃     5min
         pause
        取出迅速置于冰上
2、反转录反应：
        42℃     30min
        70℃     15min
        4℃        Hold
3、PCR反应
         94℃    2min
         94℃    30s
         55℃    30s
         72℃    1min
        （30个循环）
         72℃    5min
         12℃    Hold
         end

β-actin长度为540bp，电泳后什么都没有，很是郁闷啊，请问哪位大侠能够点拨一下？不甚感激。注：RNA提取应该没有问题。

[ Last edited by xu_hai on 2009-8-11 at 09:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-08-10 20:51:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yongpwen09

为什么不用常规PCR产物当模板呢

★
xu_hai(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-11 09:18
为什么不用常规PCR产物当模板呢
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2009-08-10 22:39:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
xu_hai(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-11 09:18
用别的引物看看你的模板有问题不？如果模板没问题，就可能是 actin引物设计的问题了。
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2009-08-11 03:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xu_hai

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by michaelwuqingyu at 2009-8-11 03:40:
用别的引物看看你的模板有问题不？如果模板没问题，就可能是 actin引物设计的问题了。

引物用的是文献上给的
赞一下 回复此楼
4楼2009-08-11 20:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
xu_hai(金币+1,VIP+0):有道理啊，我再试试，但能详细说下RNA会出啥问题呢？ 8-12 21:35
种属对吗？如果种属ok那么就是逆转录或者RNA出了问题
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2009-08-11 20:59:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
引用回帖:
Originally posted by xu_hai at 2009-8-11 20:18:


引物用的是文献上给的

千万别信文献上的，我用NATURE上面文章的引物都没P出来，以我的经验，80%照搬文献的引物都P不出来，还是自己设计吧。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2009-08-11 22:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ideal9268

铜虫 (小有名气)
★
xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
要不做个降落试试？
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2009-08-11 22:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pigsunny

铜虫 (小有名气)
★
xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
这个地方的原因很多的，你自己先摸索一下，比如PCR条件等等
赞一下(2人) 回复此楼
学习成就未来！
8楼2009-08-11 23:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
上数据库搜索以下看看是否有现成的序列，如果没有就把有的序列进行一下比对，找保守区，设计引物继续往下做
赞一下(2人) 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
9楼2009-08-12 01:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
xu_hai(金币+1,VIP+0):我测RNA含量了，达到6点几，但就是OD值比较小，只有1.4-1.5，是这个原因吗 8-12 22:04
re楼主
如果RNA没提好，比如降解了，自然就很难P
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2009-08-12 21:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xu_hai 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 5/250 2026-03-25 00:20 by 元夕元
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭