24小时热门版块排行榜    

查看: 1053  |  回复: 13
当前主题已经存档。

xu_hai

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【求助】β-actin P不出来,求教原因,急!

我提取的是青鳉鱼的脑组织RNA
实验操作:

1、变性退火反应:
         65℃     5min
         pause
        取出迅速置于冰上
2、反转录反应:
        42℃     30min
        70℃     15min
        4℃        Hold
3、PCR反应
         94℃    2min
         94℃    30s
         55℃    30s
         72℃    1min
        (30个循环)
         72℃    5min
         12℃    Hold
         end

β-actin长度为540bp,电泳后什么都没有,很是郁闷啊,请问哪位大侠能够点拨一下?不甚感激。注:RNA提取应该没有问题。

[ Last edited by xu_hai on 2009-8-11 at 09:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yongpwen09

为什么不用常规PCR产物当模板呢


xu_hai(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-11 09:18
为什么不用常规PCR产物当模板呢
2楼2009-08-10 22:39:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


xu_hai(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-11 09:18
用别的引物看看你的模板有问题不?如果模板没问题,就可能是 actin引物设计的问题了。
3楼2009-08-11 03:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xu_hai

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by michaelwuqingyu at 2009-8-11 03:40:
用别的引物看看你的模板有问题不?如果模板没问题,就可能是 actin引物设计的问题了。

引物用的是文献上给的
4楼2009-08-11 20:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


xu_hai(金币+1,VIP+0):有道理啊,我再试试,但能详细说下RNA会出啥问题呢? 8-12 21:35
种属对吗?如果种属ok那么就是逆转录或者RNA出了问题
5楼2009-08-11 20:59:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
引用回帖:
Originally posted by xu_hai at 2009-8-11 20:18:


引物用的是文献上给的

千万别信文献上的,我用NATURE上面文章的引物都没P出来,以我的经验,80%照搬文献的引物都P不出来,还是自己设计吧。
6楼2009-08-11 22:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ideal9268

铜虫 (小有名气)


xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
要不做个降落试试?
7楼2009-08-11 22:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pigsunny

铜虫 (小有名气)


xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
这个地方的原因很多的,你自己先摸索一下,比如PCR条件等等
学习成就未来!
8楼2009-08-11 23:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


xu_hai(金币+1,VIP+0): 8-12 21:36
上数据库搜索以下看看是否有现成的序列,如果没有就把有的序列进行一下比对,找保守区,设计引物继续往下做
会当凌绝顶,一览众山小
9楼2009-08-12 01:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


xu_hai(金币+1,VIP+0):我测RNA含量了,达到6点几,但就是OD值比较小,只有1.4-1.5,是这个原因吗 8-12 22:04
re楼主
如果RNA没提好,比如降解了,自然就很难P
10楼2009-08-12 21:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xu_hai 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 340求调剂 +3 话梅糖111 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:47 by hyzs6688
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 考研化学308分求调剂 +7 你好明天你好 2026-03-23 8/400 2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
信息提示
请填处理意见