24小时热门版块排行榜    

查看: 1029  |  回复: 15
当前主题已经存档。

greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 双酶切获得目的片段

我现在将DNA片段连接到了载体上,现在想通过双酶切从载体上将正确的目的片段切下来做RFLP分析,酶是BamH1和Xho1。但是我不知道目的片段中有没有这两种酶的作用位点,该怎么办?双酶切是同时反应好还是分别单酶切好?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shensc727

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):鼓励一下! 8-9 18:23
amisking(金币+2,VIP+0): 8-9 18:23
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列???要是知道,你可以用软件分析一下酶切位点就知道了!这样的软件很多,如:Dnaman, primer 5 等!
双酶切和分步酶切哪个效果好,要看你用哪两个酶组合!!!有的组合,这两种方法效果一样,有的组合分步酶切好,而有的是双酶切好!!!
双酶切时,主要看是不是有很好的公用buffer,如果没有,最好采用分步酶切!!!
祝你实验顺利!!!
2楼2009-08-06 21:48:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼上的解释很细致,严重同意
3楼2009-08-06 23:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beisimai895

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):鼓励一下! 8-9 18:23
介意去查载体说明,看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点,而且,感觉奇怪的是,即然要酶切,为什么引物设计时不加酶切位点,或者是对载体了解不清晰,怎么会到了要切的时候,才去找有没有酶切位点。
4楼2009-08-07 08:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009-8-6 21:48:
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列???要是知道,你可以用软件分析一下酶切位点就知道了!这样的软件很多,如:Dnaman, primer 5 等!
双酶切和分步酶切哪个效果好,要看你用哪两个酶组合!!!有的组合, ...

学习了
有梦就有力量,有心就会成功!
5楼2009-08-07 08:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009/8/7 08:11:
介意去查载体说明,看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点,而且,感觉奇怪的是,即然要酶切,为什么引物设计时不加酶切位点,或者是对载体了解不清晰,怎么会到了要切的时候,才去找有没有酶切位点。

我用的是克隆试剂盒,两侧的MCS都是知道的,有我上面说的那两个酶切位点。只是我现在怕目的片段中也有这两个酶的作用位点,若是这样再用此双酶切的话就得不到目的片段了。你说的有道理,可以在设计引物时加上酶切位点。不知道这样麻不麻烦?
6楼2009-08-07 08:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009/8/6 21:48:
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列???要是知道,你可以用软件分析一下酶切位点就知道了!这样的软件很多,如:Dnaman, primer 5 等!
双酶切和分步酶切哪个效果好,要看你用哪两个酶组合!!!有的组合, ...

谢谢帮助!
7楼2009-08-07 08:26:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)

谢谢楼上的回答!
8楼2009-08-07 08:27:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-9 18:24
你可以用webcutter。将你的目的片段输入后就可以分析。有什么酶切位点,没有什么酶切位点都会告诉你的!http://rna.lundberg.gu.se/cutter2/这是网址!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
9楼2009-08-07 08:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)

学习一下。
10楼2009-08-07 09:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greatsaint 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap-
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
请填处理意见