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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 双酶切获得目的片段

我现在将DNA片段连接到了载体上,现在想通过双酶切从载体上将正确的目的片段切下来做RFLP分析,酶是BamH1和Xho1。但是我不知道目的片段中有没有这两种酶的作用位点,该怎么办?双酶切是同时反应好还是分别单酶切好?
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greatsaint

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009/8/7 08:11:
介意去查载体说明,看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点,而且,感觉奇怪的是,即然要酶切,为什么引物设计时不加酶切位点,或者是对载体了解不清晰,怎么会到了要切的时候,才去找有没有酶切位点。

我用的是克隆试剂盒,两侧的MCS都是知道的,有我上面说的那两个酶切位点。只是我现在怕目的片段中也有这两个酶的作用位点,若是这样再用此双酶切的话就得不到目的片段了。你说的有道理,可以在设计引物时加上酶切位点。不知道这样麻不麻烦?
6楼2009-08-07 08:26:09
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shensc727

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+2,VIP+0): 8-9 18:23
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列???要是知道,你可以用软件分析一下酶切位点就知道了!这样的软件很多,如:Dnaman, primer 5 等!
双酶切和分步酶切哪个效果好,要看你用哪两个酶组合!!!有的组合,这两种方法效果一样,有的组合分步酶切好,而有的是双酶切好!!!
双酶切时,主要看是不是有很好的公用buffer,如果没有,最好采用分步酶切!!!
祝你实验顺利!!!
2楼2009-08-06 21:48:33
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695

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼上的解释很细致,严重同意
3楼2009-08-06 23:01:08
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beisimai895

木虫 (小有名气)

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amisking(金币+1,VIP+0):鼓励一下! 8-9 18:23
介意去查载体说明,看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点,而且,感觉奇怪的是,即然要酶切,为什么引物设计时不加酶切位点,或者是对载体了解不清晰,怎么会到了要切的时候,才去找有没有酶切位点。
4楼2009-08-07 08:11:12
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