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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切获得目的片段
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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 双酶切获得目的片段

我现在将DNA片段连接到了载体上，现在想通过双酶切从载体上将正确的目的片段切下来做RFLP分析，酶是BamH1和Xho1。但是我不知道目的片段中有没有这两种酶的作用位点，该怎么办？双酶切是同时反应好还是分别单酶切好？
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1楼 2009-08-06 21:21:10
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shensc727

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+0,VIP+0):鼓励一下！ 8-9 18:23
amisking(金币+2,VIP+0): 8-9 18:23
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列？？？要是知道，你可以用软件分析一下酶切位点就知道了！这样的软件很多，如：Dnaman, primer 5 等！
双酶切和分步酶切哪个效果好，要看你用哪两个酶组合！！！有的组合，这两种方法效果一样，有的组合分步酶切好，而有的是双酶切好！！！
双酶切时，主要看是不是有很好的公用buffer，如果没有，最好采用分步酶切！！！
祝你实验顺利！！！
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2楼2009-08-06 21:48:33
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695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼上的解释很细致，严重同意
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3楼2009-08-06 23:01:08
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0):鼓励一下！ 8-9 18:23
介意去查载体说明，看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点，而且，感觉奇怪的是，即然要酶切，为什么引物设计时不加酶切位点，或者是对载体了解不清晰，怎么会到了要切的时候，才去找有没有酶切位点。
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4楼2009-08-07 08:11:12
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liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009-8-6 21:48:
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列？？？要是知道，你可以用软件分析一下酶切位点就知道了！这样的软件很多，如：Dnaman, primer 5 等！
双酶切和分步酶切哪个效果好，要看你用哪两个酶组合！！！有的组合， ...

学习了
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有梦就有力量，有心就会成功！
5楼2009-08-07 08:16:08
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greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009/8/7 08:11:
介意去查载体说明，看截体的多克隆位点有没有你要的这二个酶位点，而且，感觉奇怪的是，即然要酶切，为什么引物设计时不加酶切位点，或者是对载体了解不清晰，怎么会到了要切的时候，才去找有没有酶切位点。

我用的是克隆试剂盒，两侧的MCS都是知道的，有我上面说的那两个酶切位点。只是我现在怕目的片段中也有这两个酶的作用位点，若是这样再用此双酶切的话就得不到目的片段了。你说的有道理，可以在设计引物时加上酶切位点。不知道这样麻不麻烦？
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6楼2009-08-07 08:26:09
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greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009/8/6 21:48:
不知道楼主知不知道你的目的基因的序列？？？要是知道，你可以用软件分析一下酶切位点就知道了！这样的软件很多，如：Dnaman, primer 5 等！
双酶切和分步酶切哪个效果好，要看你用哪两个酶组合！！！有的组合， ...

谢谢帮助！
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7楼2009-08-07 08:26:42
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greatsaint

银虫 (小有名气)
谢谢楼上的回答！
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8楼2009-08-07 08:27:24
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-9 18:24
你可以用webcutter。将你的目的片段输入后就可以分析。有什么酶切位点，没有什么酶切位点都会告诉你的！http://rna.lundberg.gu.se/cutter2/这是网址！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
9楼2009-08-07 08:37:57
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xuezhen

银虫 (小有名气)
学习一下。
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10楼2009-08-07 09:42:47
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