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怎样利用两步PCR法进行基因的合成？谢谢
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怎样利用两步PCR法进行基因的合成？ 希望大侠们能告诉我这方面的相关知识。 [ Last edited by amisking on 2009-7-30 at 20:04 ] |
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前面的回复的绝大多数是错误的。这种技术不叫“ 巢式PCR”，正好与之相反，叫做“融合PCR”。 先讲两者不同点： 巢式PCR：以第一次PCR为模板扩增此模板中的片断，产物大小比第一次PCR产物要小。 融合PCR：最简单的模型----第一步有两个PCR，第二步以这两个PCR产物为模板（体系中同时加入等量的PCR产物），第二步的产物大小是第一步两个PCR产物大小之和。 此技术的作用：1、去掉目的片断的酶切位点；2、融合两个或多个基因。 在设计引物时需要注意问题：第一步中的两个PCR引物，第一个PCR下游引物与第二个PCR上游引物要有绝大多数的重叠区（这两个引物的长度通常比较长，目前我看到的文献中最长的将近50bp）；第二步PCR的引物需要第一个PCR的上游引物和第二个PCR的下游引物；模板为第一步两个PCR产物（等量）。 当然在设计引物的时候需要考虑这四个引物的GC含量要相当，退火温度要相当。 |
12楼2009-07-31 00:01:29
2楼2009-07-30 13:54:21
3楼2009-07-30 14:29:04
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4楼2009-07-30 14:43:31
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5楼2009-07-30 14:58:08
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