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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样利用两步PCR法进行基因的合成？谢谢
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micro6790

金虫 (小有名气)

[交流] 怎样利用两步PCR法进行基因的合成？谢谢

怎样利用两步PCR法进行基因的合成？
希望大侠们能告诉我这方面的相关知识。

[ Last edited by amisking on 2009-7-30 at 20:04 ]
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1楼 2009-07-30 13:15:53
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shensc727

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的理解和以上大侠不太一样！
我认为两步PCR不是巢氏PCR！一般的PCR反应都是变性-退火-延伸三步组成，如果退火温度和延伸温度比较接近（一般65左右就可以考虑）的话，就可以进行两步PCR反应，即变性-退火（延伸）。退火和延伸放在一起进行！这样的PCR一般都用在退火温度较高，扩增高GC的模板时使用！因为这种PCR主要包括两步，所以叫两步PCR。这是我的理解！
仅供参考！不对之处请各位大侠纠正！谢谢！
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9楼2009-07-30 19:26:58
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simpleuc

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:51
你说的两部pcr法，是说用巢氏引物扩增吗？
如果是的话通常是，跑完第一轮后，将第一轮产物稀释100倍（有时1000倍，10倍的）作为第二轮pcr的模板，跑第二轮pcr
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2楼2009-07-30 13:54:21
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by simpleuc at 2009-7-30 13:54:
你说的两部pcr法，是说用巢氏引物扩增吗？
如果是的话通常是，跑完第一轮后，将第一轮产物稀释100倍（有时1000倍，10倍的）作为第二轮pcr的模板，跑第二轮pcr

对头!
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3楼2009-07-30 14:29:04
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hyde0706

木虫 (正式写手)
楼主问的是这个问题吗？如果巢式PCR，直接一步法就行了啊！稀释PCR产物很容易造成污染的。
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5楼2009-07-30 14:58:08
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