应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样利用两步PCR法进行基因的合成？谢谢
192/2返回列表上一页12
查看: 1052  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009-7-30 19:26:
我的理解和以上大侠不太一样！
我认为两步PCR不是巢氏PCR！一般的PCR反应都是变性-退火-延伸三步组成，如果退火温度和延伸温度比较接近（一般65左右就可以考虑）的话，就可以进行两步PCR反应，即变性-退火（延伸 ...

也不知道仁兄对这方面有否文献参阅？
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2009-07-30 22:42:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
前面的回复的绝大多数是错误的。这种技术不叫“ 巢式PCR”，正好与之相反，叫做“融合PCR”。
先讲两者不同点：
    巢式PCR：以第一次PCR为模板扩增此模板中的片断，产物大小比第一次PCR产物要小。
    融合PCR：最简单的模型----第一步有两个PCR，第二步以这两个PCR产物为模板（体系中同时加入等量的PCR产物），第二步的产物大小是第一步两个PCR产物大小之和。
此技术的作用：1、去掉目的片断的酶切位点；2、融合两个或多个基因。
在设计引物时需要注意问题：第一步中的两个PCR引物，第一个PCR下游引物与第二个PCR上游引物要有绝大多数的重叠区（这两个引物的长度通常比较长，目前我看到的文献中最长的将近50bp）；第二步PCR的引物需要第一个PCR的上游引物和第二个PCR的下游引物；模板为第一步两个PCR产物（等量）。
当然在设计引物的时候需要考虑这四个引物的GC含量要相当，退火温度要相当。
赞一下(3人) 回复此楼
12楼2009-07-31 00:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
这方面的资料我可以给你，把你的邮箱通过小木虫的站内信发给我，我给你发过去。
赞一下 回复此楼
13楼2009-07-31 00:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

micro6790

金虫 (小有名气)

谢谢

谢谢各位的信息
我的邮箱是   microbiology@yeah.net
现在要用这个技术合成1.9Kb的片段{动物}
用合成的基因转入酵母。
赞一下 回复此楼
14楼2009-07-31 09:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

350784478

木虫 (正式写手)
顶一下，百花齐放，百家争鸣。
赞一下 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
15楼2009-07-31 09:43:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shensc727

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
13楼的大侠，我也想要资料！我的邮箱：shensc727@163.com  谢谢！！！
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2009-08-03 18:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyidao

金虫 (小有名气)
我觉得上面的回答比较正确，就是退退火与衍生合成一步进行的。不行就上网查查看
赞一下 回复此楼
17楼2009-08-04 16:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

micro6790

金虫 (小有名气)
十五楼的兄弟，我给你转发过去了。
赞一下 回复此楼
18楼2009-08-05 13:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

micro6790

金虫 (小有名气)
大家虽然做的方向不一样，但是操作都差不多。以后大家多交流。
赞一下 回复此楼
19楼2009-08-05 13:37:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 micro6790 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:22 by 7huP8NPKZCp9
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 6/300 2026-08-15 18:18 by 7huP8NPKZCp9
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:10 by 7huP8NPKZCp9
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 6/300 2026-08-15 18:06 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +11 archvillain 2026-08-15 20/1000 2026-08-15 17:47 by 医学老男孩
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 17:42 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +27 医学老男孩 2026-08-13 58/2900 2026-08-15 15:57 by GZUZM
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:41 by KxMI1BYBxWX1
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭