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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样利用两步PCR法进行基因的合成？谢谢
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木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shensc727 at 2009-7-30 19:26:
我的理解和以上大侠不太一样！
我认为两步PCR不是巢氏PCR！一般的PCR反应都是变性-退火-延伸三步组成，如果退火温度和延伸温度比较接近（一般65左右就可以考虑）的话，就可以进行两步PCR反应，即变性-退火（延伸 ...

也不知道仁兄对这方面有否文献参阅？
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11楼2009-07-30 22:42:56
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
前面的回复的绝大多数是错误的。这种技术不叫“ 巢式PCR”，正好与之相反，叫做“融合PCR”。
先讲两者不同点：
    巢式PCR：以第一次PCR为模板扩增此模板中的片断，产物大小比第一次PCR产物要小。
    融合PCR：最简单的模型----第一步有两个PCR，第二步以这两个PCR产物为模板（体系中同时加入等量的PCR产物），第二步的产物大小是第一步两个PCR产物大小之和。
此技术的作用：1、去掉目的片断的酶切位点；2、融合两个或多个基因。
在设计引物时需要注意问题：第一步中的两个PCR引物，第一个PCR下游引物与第二个PCR上游引物要有绝大多数的重叠区（这两个引物的长度通常比较长，目前我看到的文献中最长的将近50bp）；第二步PCR的引物需要第一个PCR的上游引物和第二个PCR的下游引物；模板为第一步两个PCR产物（等量）。
当然在设计引物的时候需要考虑这四个引物的GC含量要相当，退火温度要相当。
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12楼2009-07-31 00:01:29
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anik

银虫 (正式写手)
这方面的资料我可以给你，把你的邮箱通过小木虫的站内信发给我，我给你发过去。
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13楼2009-07-31 00:03:24
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micro6790

金虫 (小有名气)

谢谢

谢谢各位的信息
我的邮箱是   microbiology@yeah.net
现在要用这个技术合成1.9Kb的片段{动物}
用合成的基因转入酵母。
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14楼2009-07-31 09:17:16
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350784478

木虫 (正式写手)
顶一下，百花齐放，百家争鸣。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
15楼2009-07-31 09:43:21
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shensc727

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
13楼的大侠，我也想要资料！我的邮箱：shensc727@163.com  谢谢！！！
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16楼2009-08-03 18:43:31
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baiyidao

金虫 (小有名气)
我觉得上面的回答比较正确，就是退退火与衍生合成一步进行的。不行就上网查查看
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17楼2009-08-04 16:43:47
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micro6790

金虫 (小有名气)
十五楼的兄弟，我给你转发过去了。
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18楼2009-08-05 13:35:34
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micro6790

金虫 (小有名气)
大家虽然做的方向不一样，但是操作都差不多。以后大家多交流。
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19楼2009-08-05 13:37:01
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