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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 包涵体变性复性
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一只鱼ddtt

银虫 (小有名气)

[交流] 包涵体变性复性 已有5人参与

我现在在做镍柱亲和层析，小量纯化，但是目的带在包涵体中表达，我是先将包涵体变性，纯化后再复性，还是变性复性后再纯化呢?能告诉一些具体的方法吗？

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-4 at 15:17 ]
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做个有风度的人
1楼 2009-07-27 10:18:20
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
都可以试一试
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2楼2009-07-27 10:54:36
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2008207380

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先在包涵体状态下纯化 然后在复性比较好吧
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3楼2009-07-27 11:48:47
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rava

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我是先将包涵体变性，纯化后再复性。不能完全复性的话，复性后再纯化一次。
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4楼2009-07-27 13:02:20
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一只鱼ddtt

银虫 (小有名气)
请问一下楼上的你做的结果怎么样啊！是小量纯化吗？一般收集多少菌体呀？
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做个有风度的人
5楼2009-07-28 10:15:32
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
都可以，这要自己摸索。

包涵体变性后上NI柱，能挂柱的最好，洗脱后有很单一的条带，有助于复性。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-08-04 09:46:51
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
支持先变性条件下纯化，然后再复性
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7楼2009-08-04 16:05:27
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rui1003

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-08-04 09:46:51:
都可以，这要自己摸索。

包涵体变性后上NI柱，能挂柱的最好，洗脱后有很单一的条带，有助于复性。

我就是把包涵体变性以后上NI柱的，但是柱子挂住的蛋白几乎很少，为什么呢？
我都让柱子和蛋白孵育过夜了，流出液里还是有很多蛋白，我是用8M的尿素变性的，我在降低尿素浓度的时候蛋白就会随着尿素流下来  很郁闷是为什么
麻烦高手指教！在下不胜感激
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8楼2010-06-02 10:50:25
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爨乡主人

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
都可以，另外还可以尝试直接在柱上复性的方法。
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9楼2014-06-15 12:03:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
摸索一下表达在上清液中的条件，包涵体不一定好搞。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2014-06-15 20:10:01
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