应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 酶容易降低酶活怎么办？
201/1返回列表
查看: 1087  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 卷卷康小西 的 2 个金币 ，回帖就立即获得 2 个金币，每人有 1 次机会

卷卷康小西

银虫 (小有名气)

[交流] 酶容易降低酶活怎么办？

用大肠杆菌表达胞内酶，每次都是从-80℃划线后再培养的，但发现前几次实验酶活还可以，后面重复的时候发现酶活降低了很多，培养条件都是一样的……很是惆怅……
有大佬了解是什么原因吗？还有，大肠杆菌菌体如果放冰上过夜再破壁的话，会对酶活有影响吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2020-12-13 23:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)
★
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
大肠杆菌冰上过夜会对酶活有影响。很多酶都不稳定，随着冻融或放置活性会降低。
酶活测量是用菌液还是纯化后的蛋白？如果是菌液的话，最好先定量一下表达水平，不要默认每次表达水平一样。
纯化蛋白尽量在一天内完成，除非需要透析。
赞一下 回复此楼
5楼2020-12-14 10:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卷卷康小西

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-12-14 10:36:44
大肠杆菌冰上过夜会对酶活有影响。很多酶都不稳定，随着冻融或放置活性会降低。
酶活测量是用菌液还是纯化后的蛋白？如果是菌液的话，最好先定量一下表达水平，不要默认每次表达水平一样。
纯化蛋白尽量在一天内完 ...

感谢回复，是把菌体离心放冰上的
请问这个菌液的表达水平要怎么定量呢？是通过蛋白浓度定量吗？
赞一下 回复此楼
14楼2020-12-17 08:31:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 卷卷康小西 at 2020-12-17 08:31:55
感谢回复，是把菌体离心放冰上的
请问这个菌液的表达水平要怎么定量呢？是通过蛋白浓度定量吗？...

WB定量菌液破碎后的上清。
当然有的时候诱导表达的条带在总可溶蛋白中非常明显，可以跑一个总可溶蛋白的考马斯蓝染色就够了。
赞一下 回复此楼
15楼2020-12-18 10:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
tzynew2楼
2020-12-13 23:51   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
9
syhorchid3楼
2020-12-13 23:58   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
miaojiabing4楼
2020-12-14 10:11   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
8
wqw8234256楼
2020-12-14 10:52   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
121
苏州华博7楼
2020-12-14 12:58   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
nono20098楼
2020-12-15 17:54   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
·
mikeshen1019楼
2020-12-15 21:14   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
gg
塞北先生10楼
2020-12-16 00:45   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
塞北先生11楼
2020-12-16 00:45   回复  
BiotageAB12楼
2020-12-16 10:44   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
M塞北13楼
2020-12-16 12:57   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
mikeshen10116楼
2020-12-18 12:34   回复  
yy
Multiply17楼
2020-12-18 13:32   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
.
yucimei118楼
2020-12-18 13:51   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
hao
psylhh19楼
2020-12-19 00:27   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
lihe13120楼
2021-09-09 11:52   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 卷卷康小西 的主题更新
201/1返回列表
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴，则可能无法领取此贴金币
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 接受26届调剂生 +22 猪猪猪毛 2026-03-06 22/1100 2026-03-11 13:58 by Lly031128
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 考研材料与化工，求调剂 +7 戏精丹丹丹 2026-03-09 7/350 2026-03-11 09:15 by @飒飒飒飒
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子！
[考研] 一志愿天津大学材料与化工275求调剂 10+5 穿只靴子 2026-03-07 19/950 2026-03-10 19:35 by zeng1010
[考研] 材料工程专硕调剂自荐信，初试323 +6 李白26 2026-03-07 6/300 2026-03-10 16:16 by 无际的草原
[考研] 材料与化工，291，求调剂 +12 咕噜咕噜123123 2026-03-05 13/650 2026-03-10 13:50 by allen-yin
[考研] 复试调剂 +6 呼呼？~+123456 2026-03-08 8/400 2026-03-10 11:36 by 呼呼？~+123456
[考研] 085600材料与化工，一志愿广州985，求调剂 +15 qqyyaill 2026-03-05 15/750 2026-03-10 08:23 by Linda Hu
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
[考研] 320求调剂 +4 魏zy 2026-03-08 4/200 2026-03-09 16:14 by ruiyingmiao
[考研] 0832食品科学与工程293调剂 +3 东东不東 2026-03-07 3/150 2026-03-09 15:58 by ls_13456
[考研] 347求调剂 +4 浮云满足 2026-03-07 4/200 2026-03-08 16:46 by 星空星月
[考研] 346分材料求调剂 +5 snow_反季节版 2026-03-07 5/250 2026-03-07 22:40 by Leeding1356
[考研] 求调剂，不管什么专业，我是可塑造的人才一枚，希望遇到知己老师捞捞我 +4 13102137290 2026-03-06 5/250 2026-03-07 21:21 by lissomchan
[考研] 求调剂 +5 danyyyy 2026-03-04 5/250 2026-03-06 08:16 by Leeding1356
[考博] 2026申博自荐 六级440电催化方向 +4 樱落成影花成双 2026-03-05 4/200 2026-03-06 07:57 by L135790
[考研] 085602 293分求调剂 +3 SivanNano. 2026-03-05 3/150 2026-03-05 19:41 by caszguilin
[考研] 267调剂求助 +5 聪少OZ 2026-03-04 5/250 2026-03-05 09:38 by kakakapanpan
[考研] 材料学硕080500复试调剂294 +3 四叶zjz 2026-03-04 3/150 2026-03-05 07:09 by kunm555
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭