应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 酶容易降低酶活怎么办？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
201/1返回列表
查看: 1109  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 卷卷康小西 的 2 个金币 ，回帖就立即获得 2 个金币，每人有 1 次机会

卷卷康小西

银虫 (小有名气)

[交流] 酶容易降低酶活怎么办？

用大肠杆菌表达胞内酶，每次都是从-80℃划线后再培养的，但发现前几次实验酶活还可以，后面重复的时候发现酶活降低了很多，培养条件都是一样的……很是惆怅……
有大佬了解是什么原因吗？还有，大肠杆菌菌体如果放冰上过夜再破壁的话，会对酶活有影响吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2020-12-13 23:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)
★
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
大肠杆菌冰上过夜会对酶活有影响。很多酶都不稳定，随着冻融或放置活性会降低。
酶活测量是用菌液还是纯化后的蛋白？如果是菌液的话，最好先定量一下表达水平，不要默认每次表达水平一样。
纯化蛋白尽量在一天内完成，除非需要透析。
赞一下 回复此楼
5楼2020-12-14 10:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卷卷康小西

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-12-14 10:36:44
大肠杆菌冰上过夜会对酶活有影响。很多酶都不稳定，随着冻融或放置活性会降低。
酶活测量是用菌液还是纯化后的蛋白？如果是菌液的话，最好先定量一下表达水平，不要默认每次表达水平一样。
纯化蛋白尽量在一天内完 ...

感谢回复，是把菌体离心放冰上的
请问这个菌液的表达水平要怎么定量呢？是通过蛋白浓度定量吗？
赞一下 回复此楼
14楼2020-12-17 08:31:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 卷卷康小西 at 2020-12-17 08:31:55
感谢回复，是把菌体离心放冰上的
请问这个菌液的表达水平要怎么定量呢？是通过蛋白浓度定量吗？...

WB定量菌液破碎后的上清。
当然有的时候诱导表达的条带在总可溶蛋白中非常明显，可以跑一个总可溶蛋白的考马斯蓝染色就够了。
赞一下 回复此楼
15楼2020-12-18 10:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
tzynew2楼
2020-12-13 23:51   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
9
syhorchid3楼
2020-12-13 23:58   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
miaojiabing4楼
2020-12-14 10:11   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
8
wqw8234256楼
2020-12-14 10:52   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
121
苏州华博7楼
2020-12-14 12:58   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
nono20098楼
2020-12-15 17:54   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
·
mikeshen1019楼
2020-12-15 21:14   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
gg
塞北先生10楼
2020-12-16 00:45   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
塞北先生11楼
2020-12-16 00:45   回复  
BiotageAB12楼
2020-12-16 10:44   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
M塞北13楼
2020-12-16 12:57   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
mikeshen10116楼
2020-12-18 12:34   回复  
yy
Multiply17楼
2020-12-18 13:32   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
.
yucimei118楼
2020-12-18 13:51   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
hao
psylhh19楼
2020-12-19 00:27   回复  
卷卷康小西(金币+2): 谢谢参与
1
lihe13120楼
2021-09-09 11:52   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 卷卷康小西 的主题更新
201/1返回列表
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴，则可能无法领取此贴金币
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 9/450 2026-04-02 12:09 by ms629
[考研] 生医工0831调剂求推荐 +5 小熊睿睿_s 2026-03-27 7/350 2026-04-02 11:30 by 纺大杨老师
[考研] 354求调剂 +4 lxb598 2026-03-31 5/250 2026-04-02 09:55 by Jaylen.
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 348求调剂 +9 zzzzyk123 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:24 by w虫虫123
[考研] 086000生物与医药298调剂求助 +4 元元青青 2026-03-31 6/300 2026-04-01 11:13 by syh9288
[硕博家园] 博一被送出联培感觉不适应怎么办 +3 全村的狗 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:44 by 328838485
[考研] 0710生物学求调剂！ +6 叙述文 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:39 by JourneyLucky
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk￥
[考研] 0856求调剂 +9 楒桉 2026-03-28 9/450 2026-03-31 19:06 by 暮泽12
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +6 小小机灵虫 2026-03-29 12/600 2026-03-31 16:58 by 记事本2026
[考研] 286求调剂 +6 Faune 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:37 by jp9609
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +5 小张zxy张 2026-03-26 10/500 2026-03-31 00:29 by jp9609
[考研] 085701环境工程求调剂 +11 多久上课 2026-03-27 12/600 2026-03-30 21:21 by 研究僧导导
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +16 李李不服输 2026-03-26 16/800 2026-03-30 17:47 by wangjy2002
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 340求调剂 +6 Amber00 2026-03-26 6/300 2026-03-29 12:06 by 无际的草原
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 340求调剂 +5 jhx777 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:18 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭