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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法
汕头大学海洋科学接受调剂
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法

因试验需要得到若干单链DNA，已知的方法是通过合成方法，可是我的用量很大，合成费用太高。

求高人指点，如何得到大量的单链DNA。

小弟想一法。如下：

将PCR最后一步变性的产物中加入含NaOH的强碱性溶液，这样的话，变性为单链的DNA

无法复性恢复为双链状态。可以得到单链DNA，不知可行否？

PS里面应该还有微量的双链DNA。如何除去？
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1楼 2009-07-23 21:00:44
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 19:20
hihoney(金币+1,VIP+0):多谢提示。正在做。 8-3 08:54
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可
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2楼2009-07-24 08:35:34
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by smallcat227 at 2009-7-24 08:35:
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可

只要其中的一条。

与要两条单链的混合物会有区别吗？

PS回收的话是普通的胶回收，还是 用特殊的回收试剂盒。

[ Last edited by hihoney on 2009-7-24 at 09:58 ]
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3楼2009-07-24 09:53:59
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lsbrc

银虫 (小有名气)
M13 phage
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4楼2009-07-24 10:36:55
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by lsbrc at 2009-7-24 10:36:
M13 phage

看到很多都是用这个试剂盒，想知道得到的是什么样的单链DNA。求教。
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5楼2009-07-27 20:28:20
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smallcat227

木虫 (著名写手)
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司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-2 21:31
引用回帖:
Originally posted by smallcat227 at 2009-7-24 08:35:
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回i收即可

普通的胶回收就可以

区别的话，是说混合物要保存在变性条件下……
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6楼2009-07-27 21:37:40
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lsbrc

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by hihoney at 2009-7-27 20:28:



看到很多都是用这个试剂盒，想知道得到的是什么样的单链DNA。求教。

环状单链DNA
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7楼2009-07-28 08:55:07
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hyde0706

木虫 (正式写手)
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 19:20
hihoney(金币+1,VIP+0):这个方法挺好，可是没这个条件。比较麻烦。 8-3 08:56
不知你有没有听过微球法制备DNA单链技术。在你需要的那条链的引物5‘端修饰生物素，进行PCR，然后将产物纯化，与包被有亲和素的磁珠进行温育。然后碱变性，因为微球是固体并且有磁性，可以被磁铁富集，然后吸出液体，就获得比较纯净的单链了。同时可以获得另一链的液相单链。
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8楼2009-07-28 10:49:42
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2008207380

金虫 (小有名气)
★ ★
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hihoney(金币+1,VIP+0):这是一个思路，多谢提供。可是要用的单链量很大，不是很可行。 8-3 08:59
提rna 再反转成cDNA也行的吧
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9楼2009-07-28 11:59:58
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by hyde0706 at 2009-7-28 10:49:
不知你有没有听过微球法制备DNA单链技术。在你需要的那条链的引物5‘端修饰生物素，进行PCR，然后将产物纯化，与包被有亲和素的磁珠进行温育。然后碱变性，因为微球是固体并且有磁性，可以被磁铁富集，然后吸出液 ...

这个是有听过，貌似成本有点高……
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10楼2009-07-28 15:37:14
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