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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法
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小虫子3198
★
hihoney(金币+1,VIP+0):多谢关注。发个关注奖。 8-3 09:00
11楼2009-07-28 19:11:24
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恒星年

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
hihoney(金币+1,VIP+0):我的片段也很小，正在用这种方法。 我用的方法是 只加一种引物，不知是否可行。欢迎有经验的您向我授渔。我的邮箱sooooongh@gmail.com . 8-3 09:18
用不对称PCR，不过我们当时做的片段的大小比较小，相信大一点的片段也可以
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12楼2009-07-28 20:31:14
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shensc727

金虫 (小有名气)
学习了！
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13楼2009-07-28 20:56:32
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greatsaint

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用M13,f1等都可以得到单链DNA。但是没做过，不知道具体如何操作。
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14楼2009-07-28 21:12:56
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 2008207380 at 2009-7-28 11:59:
提rna 再反转成cDNA也行的吧

其实成本还可以，主要是看实验次数了，如果只作一次成本肯定比较高，毕竟一个生物素修饰的引物就要200多。
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15楼2009-07-29 16:54:22
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hyde0706

木虫 (正式写手)
不好意思，引用错了。
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16楼2009-07-29 16:54:53
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 恒星年 at 2009-7-28 20:31:
用不对称PCR，不过我们当时做的片段的大小比较小，相信大一点的片段也可以

我也在做，可是怎么区分 哪个是单链，回收哪个片段？

请指教。
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17楼2009-07-30 19:39:30
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duannuo

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
也可以通过温度变化吧，94度变性10min，冰浴10min
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18楼2009-08-02 21:24:35
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by duannuo at 2009-8-2 21:24:
也可以通过温度变化吧，94度变性10min，冰浴10min

但是这样无法排除其中的双链DNA。
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19楼2009-08-02 21:50:50
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
hihoney(金币+1,VIP+0):我只加一种引物扩，得到的片段都比 用双引物 扩出来的 片段大一些。 8-3 09:28
引用回帖:
Originally posted by hihoney at 2009-7-30 19:39:



我也在做，可是怎么区分 哪个是单链，回收哪个片段？

请指教。

对照mark，原来一半的就是，比如你片段2000bp，大概1000左右的就是单链
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20楼2009-08-02 23:58:23
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