【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法 - 生物科学

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小虫子3198

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hihoney(金币+1,VIP+0):多谢关注。发个关注奖。 8-3 09:00

11楼2009-07-28 19:11:24

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恒星年

银虫 (正式写手)

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hihoney(金币+1,VIP+0):我的片段也很小，正在用这种方法。我用的方法是只加一种引物，不知是否可行。欢迎有经验的您向我授渔。我的邮箱sooooongh@gmail.com . 8-3 09:18

用不对称PCR，不过我们当时做的片段的大小比较小，相信大一点的片段也可以

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12楼2009-07-28 20:31:14

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shensc727

金虫 (小有名气)

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专业: 发酵工程

学习了！

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13楼2009-07-28 20:56:32

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greatsaint

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用M13,f1等都可以得到单链DNA。但是没做过，不知道具体如何操作。

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14楼2009-07-28 21:12:56

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hyde0706

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引用回帖:

Originally posted by 2008207380 at 2009-7-28 11:59:
提rna 再反转成cDNA也行的吧

其实成本还可以，主要是看实验次数了，如果只作一次成本肯定比较高，毕竟一个生物素修饰的引物就要200多。

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15楼2009-07-29 16:54:22

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hyde0706

木虫 (正式写手)

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不好意思，引用错了。

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16楼2009-07-29 16:54:53

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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)

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Originally posted by 恒星年 at 2009-7-28 20:31:
用不对称PCR，不过我们当时做的片段的大小比较小，相信大一点的片段也可以

我也在做，可是怎么区分哪个是单链，回收哪个片段？

请指教。

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17楼2009-07-30 19:39:30

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duannuo

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也可以通过温度变化吧，94度变性10min，冰浴10min

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18楼2009-08-02 21:24:35

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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)

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专业: 病原细菌与放线菌生物学

引用回帖:

Originally posted by duannuo at 2009-8-2 21:24:
也可以通过温度变化吧，94度变性10min，冰浴10min

但是这样无法排除其中的双链DNA。

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19楼2009-08-02 21:50:50

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smallcat227

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hihoney(金币+1,VIP+0):我只加一种引物扩，得到的片段都比用双引物扩出来的片段大一些。 8-3 09:28

引用回帖:

Originally posted by hihoney at 2009-7-30 19:39:

我也在做，可是怎么区分哪个是单链，回收哪个片段？

请指教。

对照mark，原来一半的就是，比如你片段2000bp，大概1000左右的就是单链

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20楼2009-08-02 23:58:23

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