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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法

因试验需要得到若干单链DNA，已知的方法是通过合成方法，可是我的用量很大，合成费用太高。

求高人指点，如何得到大量的单链DNA。

小弟想一法。如下：

将PCR最后一步变性的产物中加入含NaOH的强碱性溶液，这样的话，变性为单链的DNA

无法复性恢复为双链状态。可以得到单链DNA，不知可行否？

PS里面应该还有微量的双链DNA。如何除去？
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1楼 2009-07-23 21:00:44
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
hihoney(金币+1,VIP+0):我只加一种引物扩，得到的片段都比 用双引物 扩出来的 片段大一些。 8-3 09:28
引用回帖:
Originally posted by hihoney at 2009-7-30 19:39:



我也在做，可是怎么区分 哪个是单链，回收哪个片段？

请指教。

对照mark，原来一半的就是，比如你片段2000bp，大概1000左右的就是单链
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20楼2009-08-02 23:58:23
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 19:20
hihoney(金币+1,VIP+0):多谢提示。正在做。 8-3 08:54
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可
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2楼2009-07-24 08:35:34
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by smallcat227 at 2009-7-24 08:35:
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可

只要其中的一条。

与要两条单链的混合物会有区别吗？

PS回收的话是普通的胶回收，还是 用特殊的回收试剂盒。

[ Last edited by hihoney on 2009-7-24 at 09:58 ]
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3楼2009-07-24 09:53:59
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by lsbrc at 2009-7-24 10:36:
M13 phage

看到很多都是用这个试剂盒，想知道得到的是什么样的单链DNA。求教。
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5楼2009-07-27 20:28:20
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