应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法
221/3返回列表123下一页
查看: 2033  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法

因试验需要得到若干单链DNA，已知的方法是通过合成方法，可是我的用量很大，合成费用太高。

求高人指点，如何得到大量的单链DNA。

小弟想一法。如下：

将PCR最后一步变性的产物中加入含NaOH的强碱性溶液，这样的话，变性为单链的DNA

无法复性恢复为双链状态。可以得到单链DNA，不知可行否？

PS里面应该还有微量的双链DNA。如何除去？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-07-23 21:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 19:20
hihoney(金币+1,VIP+0):多谢提示。正在做。 8-3 08:54
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可
赞一下(14人) 回复此楼
2楼2009-07-24 08:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by smallcat227 at 2009-7-24 08:35:
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可

只要其中的一条。

与要两条单链的混合物会有区别吗？

PS回收的话是普通的胶回收，还是 用特殊的回收试剂盒。

[ Last edited by hihoney on 2009-7-24 at 09:58 ]
赞一下 回复此楼
3楼2009-07-24 09:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lsbrc

银虫 (小有名气)
M13 phage
回复此楼
4楼2009-07-24 10:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by lsbrc at 2009-7-24 10:36:
M13 phage

看到很多都是用这个试剂盒，想知道得到的是什么样的单链DNA。求教。
赞一下 回复此楼
5楼2009-07-27 20:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-2 21:31
引用回帖:
Originally posted by smallcat227 at 2009-7-24 08:35:
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回i收即可

普通的胶回收就可以

区别的话，是说混合物要保存在变性条件下……
赞一下(7人) 回复此楼
6楼2009-07-27 21:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lsbrc

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hihoney at 2009-7-27 20:28:



看到很多都是用这个试剂盒，想知道得到的是什么样的单链DNA。求教。

环状单链DNA
回复此楼
7楼2009-07-28 08:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 19:20
hihoney(金币+1,VIP+0):这个方法挺好，可是没这个条件。比较麻烦。 8-3 08:56
不知你有没有听过微球法制备DNA单链技术。在你需要的那条链的引物5‘端修饰生物素，进行PCR，然后将产物纯化，与包被有亲和素的磁珠进行温育。然后碱变性，因为微球是固体并且有磁性，可以被磁铁富集，然后吸出液体，就获得比较纯净的单链了。同时可以获得另一链的液相单链。
赞一下(15人) 回复此楼
8楼2009-07-28 10:49:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008207380

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
hihoney(金币+1,VIP+0):这是一个思路，多谢提供。可是要用的单链量很大，不是很可行。 8-3 08:59
提rna 再反转成cDNA也行的吧
赞一下(5人) 回复此楼
9楼2009-07-28 11:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hyde0706 at 2009-7-28 10:49:
不知你有没有听过微球法制备DNA单链技术。在你需要的那条链的引物5‘端修饰生物素，进行PCR，然后将产物纯化，与包被有亲和素的磁珠进行温育。然后碱变性，因为微球是固体并且有磁性，可以被磁铁富集，然后吸出液 ...

这个是有听过，貌似成本有点高……
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-07-28 15:37:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hihoney 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭