应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法
51/1返回列表
查看: 2048  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【单链DNA请教】如何获得单链DNA，除了合成以外的方法

因试验需要得到若干单链DNA，已知的方法是通过合成方法，可是我的用量很大，合成费用太高。

求高人指点，如何得到大量的单链DNA。

小弟想一法。如下：

将PCR最后一步变性的产物中加入含NaOH的强碱性溶液，这样的话，变性为单链的DNA

无法复性恢复为双链状态。可以得到单链DNA，不知可行否？

PS里面应该还有微量的双链DNA。如何除去？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-07-23 21:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 19:20
hihoney(金币+1,VIP+0):这个方法挺好，可是没这个条件。比较麻烦。 8-3 08:56
不知你有没有听过微球法制备DNA单链技术。在你需要的那条链的引物5‘端修饰生物素，进行PCR，然后将产物纯化，与包被有亲和素的磁珠进行温育。然后碱变性，因为微球是固体并且有磁性，可以被磁铁富集，然后吸出液体，就获得比较纯净的单链了。同时可以获得另一链的液相单链。
赞一下(15人) 回复此楼
8楼2009-07-28 10:49:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 19:20
hihoney(金币+1,VIP+0):多谢提示。正在做。 8-3 08:54
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可
赞一下(14人) 回复此楼
2楼2009-07-24 08:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by smallcat227 at 2009-7-24 08:35:
楼主是要某一条单链还是两条单链的混合物？

可以用不对称PCR，一对引物，一条正常浓度，另一条大概1/50-1/100的浓度（可以做个梯度摸下），其余条件一样，扩增之后会有单链生成，回收即可

只要其中的一条。

与要两条单链的混合物会有区别吗？

PS回收的话是普通的胶回收，还是 用特殊的回收试剂盒。

[ Last edited by hihoney on 2009-7-24 at 09:58 ]
赞一下 回复此楼
3楼2009-07-24 09:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by lsbrc at 2009-7-24 10:36:
M13 phage

看到很多都是用这个试剂盒，想知道得到的是什么样的单链DNA。求教。
赞一下 回复此楼
5楼2009-07-27 20:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭