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张瑶0729

新虫 (正式写手)


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结晶紫染色生物膜
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最近课题遇到了问题,我们发现了一株假交替单胞菌,老师让我检测一下产不产生生物膜,我用金黄色葡萄球菌做对照,用96孔板,结晶紫染色,但是每次实验都没有结果。

我的方法是摇菌液,稀释,加入96孔板,培养箱培养24h以后液体移去,PBS.清洗两遍,95%的乙醇固定5min,1%结晶紫染色5min,灭菌蒸馏水清洗3次,干燥后用酶标仪测570nm的OD值,请问是不是方法不对?大家怎么检测产不产生生物膜的

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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
26楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:17:22
菌液培养后是怎么稀释的?用培养基稀释还是?
96孔板培养后有看到菌液浑浊吗?
我的做法是将用PBS(pH7.3)将各孔冲洗3次,以洗去杂质和未黏附的菌体细胞;各管中已黏附的菌体用2ml 95%(v/v)的甲醇固定15 min, ...

你好,可以加一下好友讨论一下吗?

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28楼2020-11-15 09:19:32
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
27楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:20:11
我是用EP管做的,所以是2ml体系,用96孔板测的话就是200ul体系,96孔板静置培养时间不一定非得是24h,可以看看培养更长时间

用的培养基稀释,可以吗?

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30楼2020-11-17 08:46:00
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琴小糖

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
30楼: Originally posted by 张瑶0729 at 2020-11-17 08:46:00
用的培养基稀释,可以吗?
...

用培养基稀释没问题的
31楼2020-11-17 11:18:53
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琴小糖

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
38楼: Originally posted by 张瑶0729 at 2020-11-19 17:34:49
你好,我按照你的办法,得出结果,金黄色葡萄球菌的OD值≤ODc值,是不产生生物膜吧?所以并不是所有的金黄色葡萄球菌都会产生生物膜?
...

金黄色葡萄球菌我没怎么研究,我做的是日沟维肠杆菌,是具有产膜能力的,没有用阳性对照,就用培养基不接菌做阴性对照,96孔板培养的时候最好包一下,有点容易干,影响也挺大的
40楼2020-11-20 12:00:34
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


2楼2020-10-31 13:43:36
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biosci

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对照金葡菌产膜了吗

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23楼2020-11-01 07:20:57
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
23楼: Originally posted by biosci at 2020-11-01 07:20:57
对照金葡菌产膜了吗

没有,所以应怎么办呢?步骤是不是哪里不行?

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24楼2020-11-03 08:52:00
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
23楼: Originally posted by biosci at 2020-11-01 07:20:57
对照金葡菌产膜了吗

没有,是技术不对吗?还是?

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25楼2020-11-08 11:10:04
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琴小糖

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
菌液培养后是怎么稀释的?用培养基稀释还是?
96孔板培养后有看到菌液浑浊吗?
我的做法是将用PBS(pH7.3)将各孔冲洗3次,以洗去杂质和未黏附的菌体细胞;各管中已黏附的菌体用2ml 95%(v/v)的甲醇固定15 min,弃去甲醇,晾干EP管(或直接通风处干燥24h);用2mL 0.1%(m/v)的结晶紫水溶液染色,15 min后弃去结晶紫染液,用蒸馏水冲洗掉多余染料后再次风干2h。着色于菌体的结晶紫染料用2mL 33%(v/v)的冰醋酸重新溶解,30 min后测定光密度值OD590。
临界ODc值为空白孔平均值加上其3倍的标准差而得到的OD值,根据OD值可将菌株的生物膜形成能力分类如下:OD ≤ ODc(不形成生物膜菌株,(0)),ODc <OD≤ 2 ODc(弱生物膜形成菌株,(+)),2 ODc < OD≤ 4 ODc(中等生物膜形成菌株,(++)  ),OD > 4 ODc(强生物膜形成菌株,(+++))。
冲洗全程越轻柔越好。
26楼2020-11-13 16:17:22
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琴小糖

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我是用EP管做的,所以是2ml体系,用96孔板测的话就是200ul体系,96孔板静置培养时间不一定非得是24h,可以看看培养更长时间
27楼2020-11-13 16:20:11
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


我用的培养基稀释,可以吗?

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29楼2020-11-17 08:45:39
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
31楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 11:18:53
用培养基稀释没问题的...

请问我买的1%的结晶紫,可以直接用水稀释吗?

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32楼2020-11-17 12:40:13
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琴小糖

银虫 (小有名气)


引用回帖:
32楼: Originally posted by 张瑶0729 at 2020-11-17 12:40:13
请问我买的1%的结晶紫,可以直接用水稀释吗?
...

可以
33楼2020-11-17 13:09:31
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
27楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:20:11
我是用EP管做的,所以是2ml体系,用96孔板测的话就是200ul体系,96孔板静置培养时间不一定非得是24h,可以看看培养更长时间

临界ODc值我没有怎么看懂,怎么加上3倍的标准差?

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34楼2020-11-17 13:22:03
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
26楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:17:22
菌液培养后是怎么稀释的?用培养基稀释还是?
96孔板培养后有看到菌液浑浊吗?
我的做法是将用PBS(pH7.3)将各孔冲洗3次,以洗去杂质和未黏附的菌体细胞;各管中已黏附的菌体用2ml 95%(v/v)的甲醇固定15 min, ...

在问您一个问题,培养时间是不是对他也有影响?

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35楼2020-11-17 15:10:02
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琴小糖

银虫 (小有名气)


引用回帖:
35楼: Originally posted by 张瑶0729 at 2020-11-17 15:10:02
在问您一个问题,培养时间是不是对他也有影响?
...

有的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

36楼2020-11-17 16:23:30
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
36楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 16:23:30
有的...

临界ODc值我没有怎么看懂,怎么加上3倍的标准差?这个您可以在解释一下吗

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37楼2020-11-17 17:57:52
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


引用回帖:
36楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 16:23:30
有的...

你好,我按照你的办法,得出结果,金黄色葡萄球菌的OD值≤ODc值,是不产生生物膜吧?所以并不是所有的金黄色葡萄球菌都会产生生物膜?

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38楼2020-11-19 17:34:49
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


送红花一朵
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36楼: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 16:23:30
有的...

不同的培养基对生物膜有影响吗?

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39楼2020-11-19 17:38:42
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药化荆棘鸟

新虫 (小有名气)



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我也在做生物膜,但数值太大了,结晶紫用的0.1%,而且误差挺大的

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41楼2021-08-30 18:54:26
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2020-10-31 13:44   回复  
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ro115楼
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魔588楼
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68041610楼
2020-10-31 14:28   回复  
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朝歌062012楼
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m_inter13楼
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szgllp040819楼
2020-10-31 17:08   回复  
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jixiangbao20楼
2020-10-31 17:17   回复  
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Hot_kid21楼
2020-10-31 19:14   回复  
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xiecj22楼
2020-10-31 19:25   回复  
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