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张瑶0729

新虫 (正式写手)


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结晶紫染色生物膜
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最近课题遇到了问题,我们发现了一株假交替单胞菌,老师让我检测一下产不产生生物膜,我用金黄色葡萄球菌做对照,用96孔板,结晶紫染色,但是每次实验都没有结果。

我的方法是摇菌液,稀释,加入96孔板,培养箱培养24h以后液体移去,PBS.清洗两遍,95%的乙醇固定5min,1%结晶紫染色5min,灭菌蒸馏水清洗3次,干燥后用酶标仪测570nm的OD值,请问是不是方法不对?大家怎么检测产不产生生物膜的

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琴小糖

银虫 (小有名气)



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菌液培养后是怎么稀释的?用培养基稀释还是?
96孔板培养后有看到菌液浑浊吗?
我的做法是将用PBS(pH7.3)将各孔冲洗3次,以洗去杂质和未黏附的菌体细胞;各管中已黏附的菌体用2ml 95%(v/v)的甲醇固定15 min,弃去甲醇,晾干EP管(或直接通风处干燥24h);用2mL 0.1%(m/v)的结晶紫水溶液染色,15 min后弃去结晶紫染液,用蒸馏水冲洗掉多余染料后再次风干2h。着色于菌体的结晶紫染料用2mL 33%(v/v)的冰醋酸重新溶解,30 min后测定光密度值OD590。
临界ODc值为空白孔平均值加上其3倍的标准差而得到的OD值,根据OD值可将菌株的生物膜形成能力分类如下:OD ≤ ODc(不形成生物膜菌株,(0)),ODc <OD≤ 2 ODc(弱生物膜形成菌株,(+)),2 ODc < OD≤ 4 ODc(中等生物膜形成菌株,(++)  ),OD > 4 ODc(强生物膜形成菌株,(+++))。
冲洗全程越轻柔越好。
26楼2020-11-13 16:17:22
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张瑶0729

新虫 (正式写手)


2楼2020-10-31 13:43:36
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m_inter13楼
2020-10-31 15:06   回复  
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魔588楼
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whiteheads14楼
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68041610楼
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朝歌062012楼
2020-10-31 15:05   回复  
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ro115楼
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2020-10-31 14:59   回复  
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