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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 结晶紫染色生物膜
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张瑶0729

新虫 (正式写手)
已领完
结晶紫染色生物膜
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最近课题遇到了问题，我们发现了一株假交替单胞菌，老师让我检测一下产不产生生物膜，我用金黄色葡萄球菌做对照，用96孔板，结晶紫染色，但是每次实验都没有结果。

我的方法是摇菌液，稀释，加入96孔板，培养箱培养24h以后液体移去，PBS.清洗两遍，95％的乙醇固定5min，1％结晶紫染色5min，灭菌蒸馏水清洗3次，干燥后用酶标仪测570nm的OD值，请问是不是方法不对？大家怎么检测产不产生生物膜的

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1楼2020-10-31 13:43:28
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琴小糖

银虫 (小有名气)
★
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菌液培养后是怎么稀释的？用培养基稀释还是？
96孔板培养后有看到菌液浑浊吗？
我的做法是将用PBS（pH7.3）将各孔冲洗3次，以洗去杂质和未黏附的菌体细胞；各管中已黏附的菌体用2ml 95%（v/v）的甲醇固定15 min，弃去甲醇，晾干EP管（或直接通风处干燥24h）；用2mL 0.1%（m/v）的结晶紫水溶液染色，15 min后弃去结晶紫染液，用蒸馏水冲洗掉多余染料后再次风干2h。着色于菌体的结晶紫染料用2mL 33%（v/v）的冰醋酸重新溶解，30 min后测定光密度值OD590。
临界ODc值为空白孔平均值加上其3倍的标准差而得到的OD值，根据OD值可将菌株的生物膜形成能力分类如下：OD ≤ ODc（不形成生物膜菌株，（0）），ODc <OD≤ 2 ODc（弱生物膜形成菌株，（+）），2 ODc < OD≤ 4 ODc（中等生物膜形成菌株，（++）  ），OD > 4 ODc（强生物膜形成菌株，（+++））。
冲洗全程越轻柔越好。
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26楼2020-11-13 16:17:22
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张瑶0729

新虫 (正式写手)
拜托( ??? ? ??? )

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2楼2020-10-31 13:43:36
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m_inter13楼
2020-10-31 15:06   回复  
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star199111283楼
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秋土豆香9楼
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魔588楼
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whiteheads14楼
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68041610楼
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encryption4楼
2020-10-31 13:44   回复  
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General_hb7楼
2020-10-31 13:55   回复  
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蓉蓉番薯6楼
2020-10-31 13:55   回复  
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朝歌062012楼
2020-10-31 15:05   回复  
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ro115楼
2020-10-31 13:45   回复  
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汤圆锤锤11楼
2020-10-31 14:59   回复  
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