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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切效率低，求助
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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切效率低，求助 已有2人参与

NEB的BpuEI酶，1ul酶切不开1ug的质粒，多加酶也没用，求大神指导
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1楼 2020-10-29 16:19:37
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smyoung

新虫 (小有名气)
看看温度对不对

发自小木虫IOS客户端
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2楼2020-10-29 18:13:58
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sunny0810

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以增加一下酶切时间试试，NEB的内切酶建议的酶切时间是37°C，30 min，但我们往往会选择酶切1h，如果实在很难切开的话，可以延长至4 h或过夜
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3楼2020-11-03 21:59:36
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2020-11-05 00:43:18
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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by smyoung at 2020-10-29 18:13:58
看看温度对不对

37℃没问题
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5楼2020-11-05 13:07:04
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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by junjieshao at 2020-11-05 00:43:18
质粒质量如何，是midi的？

A260/A280,A260/A230两个比值正常，难道是残留杂质影响
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6楼2020-11-05 13:11:42
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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunny0810 at 2020-11-03 21:59:36
可以增加一下酶切时间试试，NEB的内切酶建议的酶切时间是37°C，30 min，但我们往往会选择酶切1h，如果实在很难切开的话，可以延长至4 h或过夜

谢谢，都已试效果一般
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7楼2020-11-05 13:15:33
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agricultural

新虫 (正式写手)
会不会是酶切位点不对，如何判断酶没有切开质粒的呢

发自小木虫Android客户端
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8楼2020-11-14 20:10:24
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