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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切效率低,求助 已有2人参与

NEB的BpuEI酶,1ul酶切不开1ug的质粒,多加酶也没用,求大神指导
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smyoung

新虫 (小有名气)

2楼2020-10-29 18:13:58
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sunny0810

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以增加一下酶切时间试试,NEB的内切酶建议的酶切时间是37°C,30 min,但我们往往会选择酶切1h,如果实在很难切开的话,可以延长至4 h或过夜
3楼2020-11-03 21:59:36
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junjieshao

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

4楼2020-11-05 00:43:18
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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by smyoung at 2020-10-29 18:13:58
看看温度对不对

37℃没问题
5楼2020-11-05 13:07:04
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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by junjieshao at 2020-11-05 00:43:18
质粒质量如何,是midi的?

A260/A280,A260/A230两个比值正常,难道是残留杂质影响
6楼2020-11-05 13:11:42
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yuanhuishuai

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sunny0810 at 2020-11-03 21:59:36
可以增加一下酶切时间试试,NEB的内切酶建议的酶切时间是37°C,30 min,但我们往往会选择酶切1h,如果实在很难切开的话,可以延长至4 h或过夜

谢谢,都已试效果一般
7楼2020-11-05 13:15:33
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agricultural

新虫 (正式写手)

会不会是酶切位点不对,如何判断酶没有切开质粒的呢

发自小木虫Android客户端
8楼2020-11-14 20:10:24
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