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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切问题求助
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切问题求助

最近EcoRI和XhoI双酶切已连接到T载体上的目的片段（目的片段大小为400bp左右），酶切体系为50微升，如下：
buffer：5微升，
EcoRI:2微升
XhoI：2微升
质粒：21微升
水：20微升
之前做过该体系的双酶切，电泳验证均没有问题，但是这两天重复做的时候，却怎么也得不到我的目的片段。。。
说明下，前些天是做该目的片段的回收（50微升），但一直没有回收成功，于是想加大体系（100微升），便分两管50微升双酶切，可是双酶切却出现了问题。。现在不知道怎么办才好。。。希望大家给点建议。。我都重复的有点绝望了。。。。
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1楼 2009-07-21 07:26:48
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
BUFFER 是否正确？
酶活力如何？
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2楼2009-07-21 07:40:54
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你这两天用的质粒和前段时间用的是同一管吗？不是同一批提的质粒吧！？可能是你的质粒的质量不好，影响酶切。
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
3楼2009-07-21 08:23:14
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by anik at 2009-7-21 07:40:
BUFFER 是否正确？
酶活力如何？

之前做过一样的体系，一样的双酶切都没有问题。。。不知道这两天怎么回事，就是做不出来。。根本就没有切开。。。唉。。。
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4楼2009-07-21 08:29:48
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Anson1358 at 2009-7-21 08:23:
你这两天用的质粒和前段时间用的是同一管吗？不是同一批提的质粒吧！？可能是你的质粒的质量不好，影响酶切。

恩，我也在怀疑这个问题，所以早上很早就来把之前的质粒再拿来双酶切一次，看看是不是我的质粒问题。。。。
但是，前天用的那管质粒跟之前有做出来的某一次用的质粒是来自同一管的。。。唉，这个研究，重复性差啊，经常弄的自己都找不到答案。。。
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5楼2009-07-21 08:36:53
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caoliang38

铁虫 (小有名气)

跑胶的时候怎么样？

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
跑胶的时候的带能不能有所启示？会不会酶失活了 现在天热 很容易
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6楼2009-07-21 09:54:13
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ly888lsp

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是你的质粒的质量不好，影响酶切。
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7楼2009-07-21 10:21:08
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wql1828

木虫 (小有名气)

helix
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒的质量不好最有可能！！！
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8楼2009-07-21 10:47:33
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jian520yi

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得有可能是酶失活了，酶容易不小心污染失活也没有意识到
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成功源自于不断的努力和坚持
9楼2009-07-21 17:09:26
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smurfen

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主发一下酶切后的电泳图哦

是没有目的片段还是载体的那条大片段也没切出来？

要是有载体的话可能是TA克隆没有做好呢
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Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
10楼2009-07-21 17:24:00
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