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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切问题求助
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切问题求助

最近EcoRI和XhoI双酶切已连接到T载体上的目的片段（目的片段大小为400bp左右），酶切体系为50微升，如下：
buffer：5微升，
EcoRI:2微升
XhoI：2微升
质粒：21微升
水：20微升
之前做过该体系的双酶切，电泳验证均没有问题，但是这两天重复做的时候，却怎么也得不到我的目的片段。。。
说明下，前些天是做该目的片段的回收（50微升），但一直没有回收成功，于是想加大体系（100微升），便分两管50微升双酶切，可是双酶切却出现了问题。。现在不知道怎么办才好。。。希望大家给点建议。。我都重复的有点绝望了。。。。
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1楼 2009-07-21 07:26:48
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smurfen

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主发一下酶切后的电泳图哦

是没有目的片段还是载体的那条大片段也没切出来？

要是有载体的话可能是TA克隆没有做好呢
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Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
10楼2009-07-21 17:24:00
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
BUFFER 是否正确？
酶活力如何？
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2楼2009-07-21 07:40:54
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你这两天用的质粒和前段时间用的是同一管吗？不是同一批提的质粒吧！？可能是你的质粒的质量不好，影响酶切。
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
3楼2009-07-21 08:23:14
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by anik at 2009-7-21 07:40:
BUFFER 是否正确？
酶活力如何？

之前做过一样的体系，一样的双酶切都没有问题。。。不知道这两天怎么回事，就是做不出来。。根本就没有切开。。。唉。。。
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4楼2009-07-21 08:29:48
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