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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 大肠杆菌蛋白表达时用何种方法去除N端甲硫氨酸?
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cindyyue19

金虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌蛋白表达时用何种方法去除N端甲硫氨酸?

最近想要表达蛋白，想要去掉N端的甲硫氨酸，请问哪位高手能指导一二?
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1楼 2020-09-22 00:11:13
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heylixing

铁虫 (正式写手)
★
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我们也出现这样的问题，蛋白的甲硫氨酸去除不完全。有文献报道可以使用氨肽酶处理纯化后的蛋白，Aminopeptidase M处理人生长激素(nakagawa1987)。
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8楼2020-10-08 22:14:02
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mritang

新虫 (知名作家)
你的导师。

发自小木虫Android客户端
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没有努力，再好的远见也只有是一个不切实际的梦想。努力不懈，才能达到有价值的目标。
2楼2020-09-22 07:08:12
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
细胞表达蛋白后，第一个氨基酸（F-Met）会被deformylase切除。

然鹅，如果表达量大，也有出现该残基不会全被切除，这个时候可以通过融合表达后切除的方法，得到不含F-Met的蛋白。

去掉该残基盒不去掉该残基引起蛋白性质变化很大的情况有，但极少
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行至水穷处，坐看云起时
3楼2020-09-22 08:04:34
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zsygxh

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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cindyyue19: 金币+8 2020-09-22 16:58:31
首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞内能被部分切除，切除的效率受第二位氨基酸侧链的影响较大，不同序列切割率差异比较大。如果你是想要纯化一些均一的不含fMet的目的蛋白做实验，而不是用于大量生产的话，建议你在序列前面融合能完全切除的标签，比如在前面融合DDDDK，纯化后用肠激酶切除，或者融合sumo标签，用ULP1切除，能得到均一的目的蛋白。
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4楼2020-09-22 13:24:19
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