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cindyyue19

金虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌蛋白表达时用何种方法去除N端甲硫氨酸?

最近想要表达蛋白,想要去掉N端的甲硫氨酸,请问哪位高手能指导一二?
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
细胞表达蛋白后,第一个氨基酸(F-Met)会被deformylase切除。

然鹅,如果表达量大,也有出现该残基不会全被切除,这个时候可以通过融合表达后切除的方法,得到不含F-Met的蛋白。

去掉该残基盒不去掉该残基引起蛋白性质变化很大的情况有,但极少
行至水穷处,坐看云起时
3楼2020-09-22 08:04:34
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mritang

新虫 (知名作家)

没有努力,再好的远见也只有是一个不切实际的梦想。努力不懈,才能达到有价值的目标。
2楼2020-09-22 07:08:12
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zsygxh

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
cindyyue19: 金币+8 2020-09-22 16:58:31
首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞内能被部分切除,切除的效率受第二位氨基酸侧链的影响较大,不同序列切割率差异比较大。如果你是想要纯化一些均一的不含fMet的目的蛋白做实验,而不是用于大量生产的话,建议你在序列前面融合能完全切除的标签,比如在前面融合DDDDK,纯化后用肠激酶切除,或者融合sumo标签,用ULP1切除,能得到均一的目的蛋白。
4楼2020-09-22 13:24:19
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cindyyue19

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zsygxh at 2020-09-22 13:24:19
首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞内能被部分切除,切除的效率受第二位氨基酸侧链的影响较大,不同序列切割率差异比较大。如果你是想要纯化一些均一的不含fMet的目的蛋白做实验,而不是用于大量生产的话,建议你在序列前 ...

请问您知道大量生产的话,一般用什么方法去除吗?
5楼2020-09-22 17:11:57
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