24小时热门版块排行榜    

查看: 2868  |  回复: 8
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 cindyyue19 的 1 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cindyyue19

金虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌蛋白表达时用何种方法去除N端甲硫氨酸?

最近想要表达蛋白,想要去掉N端的甲硫氨酸,请问哪位高手能指导一二?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
细胞表达蛋白后,第一个氨基酸(F-Met)会被deformylase切除。

然鹅,如果表达量大,也有出现该残基不会全被切除,这个时候可以通过融合表达后切除的方法,得到不含F-Met的蛋白。

去掉该残基盒不去掉该残基引起蛋白性质变化很大的情况有,但极少
行至水穷处,坐看云起时
3楼2020-09-22 08:04:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

mritang

新虫 (知名作家)

没有努力,再好的远见也只有是一个不切实际的梦想。努力不懈,才能达到有价值的目标。
2楼2020-09-22 07:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsygxh

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
cindyyue19: 金币+8 2020-09-22 16:58:31
首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞内能被部分切除,切除的效率受第二位氨基酸侧链的影响较大,不同序列切割率差异比较大。如果你是想要纯化一些均一的不含fMet的目的蛋白做实验,而不是用于大量生产的话,建议你在序列前面融合能完全切除的标签,比如在前面融合DDDDK,纯化后用肠激酶切除,或者融合sumo标签,用ULP1切除,能得到均一的目的蛋白。
4楼2020-09-22 13:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cindyyue19

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zsygxh at 2020-09-22 13:24:19
首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞内能被部分切除,切除的效率受第二位氨基酸侧链的影响较大,不同序列切割率差异比较大。如果你是想要纯化一些均一的不含fMet的目的蛋白做实验,而不是用于大量生产的话,建议你在序列前 ...

请问您知道大量生产的话,一般用什么方法去除吗?
5楼2020-09-22 17:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 327求调剂 +3 Ffff03 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:30 by macy2011
[考研] 一志愿天津大学,英一数二305分求调剂,四六级已过 +7 小小番的茄 2026-03-09 7/350 2026-03-10 16:48 by ztnimte
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +5 XMCMM3.14159 2026-03-10 5/250 2026-03-10 15:41 by shangxh
[考研] 一志愿天大化工(085600)调剂总分338 +5 蔡大美女 2026-03-09 5/250 2026-03-10 14:44 by ruiyingmiao
[考研] 0817化学工程319求调剂 +7 lv945 2026-03-08 9/450 2026-03-10 11:44 by peike
[考研] 考研一志愿长安大学材料与化工309分请求调剂 +6 dtdxzxx 2026-03-06 8/400 2026-03-10 08:31 by Linda Hu
[考研] 310 070300化学求调剂 +4 扑风铃的猫 2026-03-08 5/250 2026-03-09 19:46 by 30660438
[考研] 334求调剂 +5 Trying] 2026-03-07 5/250 2026-03-09 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 0703化学求调剂 +4 很老实人 2026-03-09 4/200 2026-03-09 13:38 by macy2011
[考研] 中科大材料299求调剂 +10 DAIjiayo 2026-03-05 16/800 2026-03-09 10:45 by 斩魂滴兔子!
[考研] 考研求调剂,工科,总分304 +4 矮子不想长高了 2026-03-08 7/350 2026-03-08 22:21 by 小木虫tim
[考博] 26年博士申请 +4 科研狗111 2026-03-07 4/200 2026-03-08 21:56 by 0611517sll
[考研] 化学工程与技术316求调剂 +7 Sixuan wang 2026-03-06 7/350 2026-03-08 11:23 by 我的船我的海
[考研] 346分材料求调剂 +5 snow_反季节版 2026-03-07 5/250 2026-03-07 22:40 by Leeding1356
[考研] 一志愿郑大071000分数282求调剂 +3 研研颜 2026-03-05 7/350 2026-03-07 22:33 by 帆船哥
[考研] 一志愿211 化学305分求调剂 +3 0703杨悦305分 2026-03-05 3/150 2026-03-07 21:15 by yinhuanshun
[考研] 304求调剂 +4 52hz~~ 2026-03-05 5/250 2026-03-07 15:47 by lature00
[考研] 316求调剂 +3 林小星发大财 2026-03-05 5/250 2026-03-06 09:05 by Iveryant
[考博] 2026申博自荐 六级440电催化方向 +4 樱落成影花成双 2026-03-05 4/200 2026-03-06 07:57 by L135790
信息提示
请填处理意见