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cindyyue19金虫 (小有名气)
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[交流]
大肠杆菌蛋白表达时用何种方法去除N端甲硫氨酸?
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| 最近想要表达蛋白，想要去掉N端的甲硫氨酸，请问哪位高手能指导一二? |
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zsygxh
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cindyyue19: 金币+1 2020-10-07 09:56:36
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
cindyyue19: 金币+1 2020-10-07 09:56:36
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我前面的表述可能有点问题。我本意是想说，如果你是在实验室里，需要几十到几百mg蛋白用于实验研究，那么直接重新构建质粒，在N端连上一个能完全去除的标签就行了，这样简单、方便、高效。如果你是在药企或其它单位，需要大量生产这个蛋白的话，那么需要考虑产量的问题。比如，在菌体表达蛋白总量相当的情况下，融合标签越长，目的蛋白占总蛋白比例就越少，所以产量就越少，而如果你的目的蛋白分子量本身就很小，那影响会更明显。再比如，序列发生变化，表达量也会变化，极端（且常见）情况下甚至不表达。所以如果是生产的情况，建议你尝试构建多种不同的标签，根据实际表达来定夺（需要考虑融合蛋白的表达总量，蛋白结构/活性的变化，副产物对后续工艺的影响等等，比较麻烦）。我前面语境好像在说融合标签不适合生产，其实融合在生物制药生产中是很常见的，这其实只是我表述有问题。其它能够彻底、均一地切除fMet并且不对目的蛋白结构造成影响的方法，目前我不太清楚。 |
cindyyue196楼2020-09-25 16:38:59
mritang
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