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yimifffffff

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转化不长菌 已有1人参与

我做的重组质粒,把1000bp的基因片段连接到5.3kb的pet26b载体上,转化到Origami2大肠杆菌感受态细胞,用的加了抗生素的LB平板,不长菌是怎么回事呀?做了对照:空载体直接转化,涂到抗生素平板,也是不长菌;但是涂到没加抗生素的平板上长了一堆密密麻麻的小菌落,到底咋回事呀?

@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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ppppzj5201

铁虫 (小有名气)

化转后重旋的菌液分开涂两个单抗板,筛下哪个板有问题?

发自小木虫Android客户端
8楼2021-04-19 22:13:54
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峨眉小强

铁杆木虫 (著名写手)

2楼2020-09-06 22:36:31
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cy19880610

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
时间放长一点。一般来说大肠杆菌8到10个小时菌斑就很大了,但是有的基因转化进去后会导致菌落生长缓慢。我当年有个基因构建载体到大肠杆菌感受态后,需要3~5天才能长出正常大小的菌斑,当时一度以为是杂菌,构建了2个月,后来发现就是这么慢,导致开始生长缓慢觉得平板上完全没有生长。
善男信女
3楼2020-09-07 08:56:03
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cy19880610 at 2020-09-07 08:56:03
时间放长一点。一般来说大肠杆菌8到10个小时菌斑就很大了,但是有的基因转化进去后会导致菌落生长缓慢。我当年有个基因构建载体到大肠杆菌感受态后,需要3~5天才能长出正常大小的菌斑,当时一度以为是杂菌,构建了2 ...

现在已经32个小时了,还是一点都没长,我做了好几个板子,都没长,但是没加抗生素的板子都已经长成大菌斑了,太愁人了。。

发自小木虫IOS客户端
4楼2020-09-07 12:20:38
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