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yimifffffff

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转化不长菌 已有1人参与

我做的重组质粒,把1000bp的基因片段连接到5.3kb的pet26b载体上,转化到Origami2大肠杆菌感受态细胞,用的加了抗生素的LB平板,不长菌是怎么回事呀?做了对照:空载体直接转化,涂到抗生素平板,也是不长菌;但是涂到没加抗生素的平板上长了一堆密密麻麻的小菌落,到底咋回事呀?

@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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cy19880610

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
时间放长一点。一般来说大肠杆菌8到10个小时菌斑就很大了,但是有的基因转化进去后会导致菌落生长缓慢。我当年有个基因构建载体到大肠杆菌感受态后,需要3~5天才能长出正常大小的菌斑,当时一度以为是杂菌,构建了2个月,后来发现就是这么慢,导致开始生长缓慢觉得平板上完全没有生长。
善男信女
3楼2020-09-07 08:56:03
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峨眉小强

铁杆木虫 (著名写手)

2楼2020-09-06 22:36:31
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cy19880610 at 2020-09-07 08:56:03
时间放长一点。一般来说大肠杆菌8到10个小时菌斑就很大了,但是有的基因转化进去后会导致菌落生长缓慢。我当年有个基因构建载体到大肠杆菌感受态后,需要3~5天才能长出正常大小的菌斑,当时一度以为是杂菌,构建了2 ...

现在已经32个小时了,还是一点都没长,我做了好几个板子,都没长,但是没加抗生素的板子都已经长成大菌斑了,太愁人了。。

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4楼2020-09-07 12:20:38
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 峨眉小强 at 2020-09-06 22:36:31
是不是抗性弄错了呀

用的pet26b载体,抗生素是卡那,没错呀,我加了双抗,pet26b的卡那(终浓度50ug/ml)和Origami2(DE3)的四环素(终浓度50ug/ml),还做了空载体的对照(也加双抗),都不长菌,32小时了,不加抗生素的板子都长了大菌斑了~

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5楼2020-09-07 12:24:13
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