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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒转化不长菌
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转化不长菌 已有1人参与

我做的重组质粒，把1000bp的基因片段连接到5.3kb的pet26b载体上，转化到Origami2大肠杆菌感受态细胞，用的加了抗生素的LB平板，不长菌是怎么回事呀？做了对照：空载体直接转化，涂到抗生素平板，也是不长菌；但是涂到没加抗生素的平板上长了一堆密密麻麻的小菌落，到底咋回事呀？

@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2020-09-06 20:45:52
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 峨眉小强 at 2020-09-06 22:36:31
是不是抗性弄错了呀

用的pet26b载体，抗生素是卡那，没错呀，我加了双抗，pet26b的卡那（终浓度50ug/ml）和Origami2（DE3）的四环素（终浓度50ug/ml），还做了空载体的对照（也加双抗），都不长菌，32小时了，不加抗生素的板子都长了大菌斑了～

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5楼2020-09-07 12:24:13
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峨眉小强

铁杆木虫 (著名写手)
是不是抗性弄错了呀

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2楼2020-09-06 22:36:31
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cy19880610

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
时间放长一点。一般来说大肠杆菌8到10个小时菌斑就很大了，但是有的基因转化进去后会导致菌落生长缓慢。我当年有个基因构建载体到大肠杆菌感受态后，需要3~5天才能长出正常大小的菌斑，当时一度以为是杂菌，构建了2个月，后来发现就是这么慢，导致开始生长缓慢觉得平板上完全没有生长。
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善男信女
3楼2020-09-07 08:56:03
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cy19880610 at 2020-09-07 08:56:03
时间放长一点。一般来说大肠杆菌8到10个小时菌斑就很大了，但是有的基因转化进去后会导致菌落生长缓慢。我当年有个基因构建载体到大肠杆菌感受态后，需要3~5天才能长出正常大小的菌斑，当时一度以为是杂菌，构建了2 ...

现在已经32个小时了，还是一点都没长，我做了好几个板子，都没长，但是没加抗生素的板子都已经长成大菌斑了，太愁人了。。

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4楼2020-09-07 12:20:38
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