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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助蛋白纯化！！蛋白过不下来怎么办呀！
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ym9364

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助蛋白纯化！！蛋白过不下来怎么办呀！ 已有1人参与

目的蛋白分子量53Kd，等电点5.05，ph7.2-7.4最稳定，我用36-86mmol/l NaH2PO4缓冲液洗脱的！ph调的 7.3  但是都没有条带，是怎么回事啊。上样前的有目的条带！过了柱子就没有！

求助蛋白纯化！！蛋白过不下来怎么办呀！


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1楼 2020-08-03 12:44:51
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匿名

本帖仅楼主可见
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2楼2020-08-03 13:08:38
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正清哲和

至尊木虫 (职业作家)
如果是6×his标签的，应该要用咪唑才能置换冲洗下来
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对他人，可以善待、珍重，但无需寄以厚望，依旧充满感激 ，做好自己！
3楼2020-08-03 18:31:04
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正清哲和

至尊木虫 (职业作家)
如果是融合了GST-Tag的，要用谷胱甘肽（GSH）冲洗下来
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对他人，可以善待、珍重，但无需寄以厚望，依旧充满感激 ，做好自己！
4楼2020-08-03 18:33:14
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
过离子柱？ 36-86mmol/l NaH2PO4缓冲液，换成36-500mMNaH2PO4缓冲液试试看
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2020-08-04 09:38:33
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ym9364

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2020-08-04 09:38:33
过离子柱？ 36-86mmol/l NaH2PO4缓冲液，换成36-500mMNaH2PO4缓冲液试试看

换了，还是没有！唉

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6楼2020-08-12 11:05:03
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ym9364

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 正清哲和 at 2020-08-03 18:31:04
如果是6×his标签的，应该要用咪唑才能置换冲洗下来

没有用标签呢

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7楼2020-08-12 11:05:20
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ym9364

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 龙腾92 at 2020-08-03 13:08:38
不应该结合在柱子上吗，用缓冲液就能洗下来？？？你用什么纯化的啊？

我过得DEAE柱，

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8楼2020-08-12 11:05:51
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雪色残洋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ym9364 at 2020-08-12 11:05:51
我过得DEAE柱，
...

平衡液+0.5M氯化钠或者其他浓度的氯化钠试试
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9楼2020-08-15 16:19:23
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雪色残洋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ym9364 at 2020-08-12 11:05:51
我过得DEAE柱，
...

而且DEAE一般用哌嗪、组氨酸等做平衡液，磷酸盐一般用于SP和CM的平衡
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10楼2020-08-15 16:26:24
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