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ym9364

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助蛋白纯化!!蛋白过不下来怎么办呀!已有1人参与

目的蛋白分子量53Kd,等电点5.05,ph7.2-7.4最稳定,我用36-86mmol/l NaH2PO4缓冲液洗脱的!ph调的 7.3  但是都没有条带,是怎么回事啊。上样前的有目的条带!过了柱子就没有!

求助蛋白纯化!!蛋白过不下来怎么办呀!


@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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匿名

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2楼2020-08-03 13:08:38
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正清哲和

至尊木虫 (职业作家)

如果是6×his标签的,应该要用咪唑才能置换冲洗下来
对他人,可以善待、珍重,但无需寄以厚望,依旧充满感激 ,做好自己!
3楼2020-08-03 18:31:04
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正清哲和

至尊木虫 (职业作家)

如果是融合了GST-Tag的,要用谷胱甘肽(GSH)冲洗下来
对他人,可以善待、珍重,但无需寄以厚望,依旧充满感激 ,做好自己!
4楼2020-08-03 18:33:14
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
过离子柱? 36-86mmol/l NaH2PO4缓冲液,换成36-500mMNaH2PO4缓冲液试试看
行至水穷处,坐看云起时
5楼2020-08-04 09:38:33
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ym9364

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2020-08-04 09:38:33
过离子柱? 36-86mmol/l NaH2PO4缓冲液,换成36-500mMNaH2PO4缓冲液试试看

换了,还是没有!唉

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6楼2020-08-12 11:05:03
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ym9364

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 正清哲和 at 2020-08-03 18:31:04
如果是6×his标签的,应该要用咪唑才能置换冲洗下来

没有用标签呢

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7楼2020-08-12 11:05:20
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ym9364

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 龙腾92 at 2020-08-03 13:08:38
不应该结合在柱子上吗,用缓冲液就能洗下来???你用什么纯化的啊?

我过得DEAE柱,

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8楼2020-08-12 11:05:51
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雪色残洋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ym9364 at 2020-08-12 11:05:51
我过得DEAE柱,
...

平衡液+0.5M氯化钠或者其他浓度的氯化钠试试
9楼2020-08-15 16:19:23
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雪色残洋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ym9364 at 2020-08-12 11:05:51
我过得DEAE柱,
...

而且DEAE一般用哌嗪、组氨酸等做平衡液,磷酸盐一般用于SP和CM的平衡
10楼2020-08-15 16:26:24
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