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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE电泳后蛋白质回收
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油菜米米

[交流] SDS-PAGE电泳后蛋白质回收

我想从SDS-PAGE电泳后的胶上直接把目的条带挖胶回收，电泳完考染，挖胶以后用提取液沸水浴提取5min后丙酮沉淀，再次电泳就发现在目的条带下面还有好多其他的带而且位置还很靠下，应该不是挖胶时挖到附近带的原因。按理说这个时候应该是纯的一条带了啊，请问下大家这是什么原因呢？有没有哪位做过回收告诉我下，谢谢！！
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1楼 2009-07-14 18:39:26
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孟庆石

★
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SDS电泳上的一条带不能代表就是一个蛋白，用我质谱打一条SDS-PAGE胶上的一条带，经常可以打不好几个蛋白。而且你在蛋白重新溶解和沉淀过程中，可能会出现蛋白结构的变化
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2楼2009-07-14 22:34:25
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小小木虫8580

金虫 (小有名气)
★
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SDS电泳跟结构变化应该没有关系，可能是肽链断裂？
不过同意二楼，SDS上的一条带一般不止一个蛋白。
也有可能是回收纯化过程污染。
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3楼2009-07-14 22:50:04
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油菜米米

那有没有哪位做过回收的，能不能提供下好的回收办法啊，谢谢啦！
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4楼2009-07-15 09:29:35
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油菜米米

SDS-PAGE电泳上的一条带就算不一定是一个蛋白质，那回收后再次电泳他们也应该还是在一条带上吧，都是同样的条件电泳那就应该分不开啊，请虫友们指教一下。
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5楼2009-07-15 09:50:57
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baisuilan

金虫 (正式写手)
★
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我觉得 是沸水浴 给煮降解了
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6楼2009-07-15 14:15:06
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油菜米米

但是蛋白质电泳前不是都要沸水煮5min变性吗？应该不会讲解哦
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7楼2009-07-15 14:36:32
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
变性胶，还能回收？
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8楼2009-07-15 15:32:21
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GinTonic

金虫 (小有名气)
★
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个人觉得应该用高浓度的page胶 长时间跑
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9楼2009-07-15 17:12:54
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