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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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stella0xhx

新虫 (小有名气)

[交流] 基因带六个his标签,蛋白纯化时为何挂不上镍柱 已有9人参与

克隆了一个肠激酶的基因,设计引物时加了6个his,蛋白可溶性还行,可是做蛋白纯化时,用的镍柱,但是目标蛋白就是挂不上柱,磷酸盐和tris-Hcl 的缓冲液都试过了,没法,请教各位高手,怎么办啊?
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
重组表达的蛋白结构不一定是正确的,尿素变性后可以复性的。
我们这边出现过做着做着,挂不上柱了。重新取保的菌种做,又能挂上了。之前挂不上应该是菌种退化了。

[ 发自小木虫客户端 ]
26楼2014-09-23 20:33:41
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zplipeng

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不懂啊。。。。
等待高人回答
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-12 09:47:04
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txstbbm

铁虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-12 10:51
可能情况:
1,ORF不完整或者不是预期的ORF,His没表达出来
2,His被空间结构所掩盖,建议变性后再过柱
3楼2009-07-12 09:49:01
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cloudy3197

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-12 11:27
同一ls,可能跟蛋白空间结构有关,变性后再上柱。

另外,是否是柱子本身的问题,也可以重新脱镍挂镍后再看看~~
4楼2009-07-12 11:18:22
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