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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物扩增不出来，只有引物二聚体的位置有条带
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wjykycg

至尊木虫 (正式写手)

[交流] PCR产物扩增不出来，只有引物二聚体的位置有条带 已有9人参与

模板是反转录的cDNA，怀疑过模板的问题，换了几批不同细胞的cDNA还是不行。也怀疑过引物，重新合成过，也调整过序列重新合成，都不行。

关键是之前扩增出来过，但是后来就怎么也扩增不出来。难道是聚合酶或者Buffer出问题了？
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1楼 2020-06-02 18:22:18
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Lucas_C

新虫 (小有名气)
★
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把引物混合后用水煮沸5分钟，迅速冰浴两分钟，然后再配置体系试一下

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9楼2020-07-01 13:21:48
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
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你设计一个内参基因作为阳性对照，确保你模板没问题，然后就是你的基因大小问题，如果基因太大，那就分段PCR克隆，1000bp以内都还好，酶的问题，可能性比较低，还有就是你试试把PCR产物作为模板进行二次PCR，你试试吧

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7楼2020-06-20 01:35:39
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用高保真酶试试吧

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3楼2020-06-08 21:52:28
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gaorj

金虫 (正式写手)
可以考虑pfu加taq看看能不能出来。出不来的原因很多。

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8楼2020-06-26 19:09:39
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普通回帖

leejsmu

木虫 (小有名气)

年輕的心
用的啥试剂

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ole
2楼2020-06-03 16:33:55
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qaz199018

金虫 (小有名气)
★
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换种酶，然后退火温度调低
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~~~
4楼2020-06-12 21:00:16
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2020-06-13 05:24:47
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阿拉很强大

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我感觉退火温度可能是关键，我之前也像这样，然后看了退火温度没有设置好。
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6楼2020-06-15 12:41:20
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葉倾诚cc

铁虫 (初入文坛)
★
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麻烦你先去用一个其它确定能跑出来的引物去试下，先确定cdna没问题了再说。

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科研路漫漫，何处是归鸿。
10楼2020-07-02 14:41:16
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