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brassica227

铁虫 (小有名气)

[交流] PCR最高的退火温度

请问各位虫有,做PCR时最高的退火温度能达多少?可不可以超过65度
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)

★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-10 21:28
那要看你引物的Tm值了,如果Tm值较高,那65度退火没有问题。总的来说,只要能保证引物同目的序列有效退火就行。合理的退火温度从50℃到70℃。
2楼2009-07-10 15:56:42
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)

退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃
3楼2009-07-10 15:57:36
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-10 21:28
是不是GC含量高导致Tm值高啊,这样的话可以用GC buffer。可以不必按照退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃原则,设计在60-62 之间或者再调整一下
4楼2009-07-10 16:38:20
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


brassica227(金币+1):thanks!
做过退火温度68 ℃。
Thank-you,so-blue.
5楼2009-07-10 17:31:03
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wql1828

木虫 (小有名气)

helix


brassica227(金币+1):thanks!
你可以用高保真酶去做做    如果GC含量高导致Tm值高!
6楼2009-07-10 17:31:27
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


brassica227(金币+1,VIP+0):thanks! 7-10 20:59
我做过66℃的,没问题
7楼2009-07-10 18:33:15
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heismeng

金虫 (小有名气)

我刚做了一个69度的 只要能得到你目的产物就可以了吧
8楼2009-07-10 20:00:58
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hyf9901

铁杆木虫 (著名写手)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-10 21:28
我扩基因最多的做过72度退火的,最低的42度,做TAIL-PCR最低用过25度
关键看你想要干什么
滴自己的汗,吃自己的饭,自己的事情自己办,不抱怨,不诉苦,走一步,是一步,一路朝前不回头,死到哪站算哪站
9楼2009-07-10 20:14:30
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hyf9901 at 2009-7-10 20:14:
我扩基因最多的做过72度退火的,最低的42度,做TAIL-PCR最低用过25度
关键看你想要干什么

请问楼上这位仁兄,你tail-PCR的操作流程,能否给出一个实例或是实验记录的东东,不瞒你说我最近在研究这个东西
10楼2009-07-10 21:09:03
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