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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR最高的退火温度
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brassica227

铁虫 (小有名气)

[交流] PCR最高的退火温度

请问各位虫有，做PCR时最高的退火温度能达多少？可不可以超过65度
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1楼 2009-07-10 15:50:56
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)
★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-10 21:28
那要看你引物的Tm值了，如果Tm值较高，那65度退火没有问题。总的来说，只要能保证引物同目的序列有效退火就行。合理的退火温度从50℃到70℃。
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2楼2009-07-10 15:56:42
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)
退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃
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3楼2009-07-10 15:57:36
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-10 21:28
是不是GC含量高导致Tm值高啊，这样的话可以用GC buffer。可以不必按照退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃原则，设计在60-62 之间或者再调整一下
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4楼2009-07-10 16:38:20
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
brassica227(金币+1):thanks!
做过退火温度68 ℃。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-07-10 17:31:03
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wql1828

木虫 (小有名气)

helix
★
brassica227(金币+1):thanks!
你可以用高保真酶去做做    如果GC含量高导致Tm值高!
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6楼2009-07-10 17:31:27
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
brassica227(金币+1,VIP+0):thanks! 7-10 20:59
我做过66℃的，没问题
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7楼2009-07-10 18:33:15
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heismeng

金虫 (小有名气)
我刚做了一个69度的 只要能得到你目的产物就可以了吧
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8楼2009-07-10 20:00:58
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hyf9901

铁杆木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-10 21:28
我扩基因最多的做过72度退火的，最低的42度，做TAIL-PCR最低用过25度
关键看你想要干什么
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滴自己的汗，吃自己的饭，自己的事情自己办，不抱怨，不诉苦，走一步，是一步，一路朝前不回头，死到哪站算哪站
9楼2009-07-10 20:14:30
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hyf9901 at 2009-7-10 20:14:
我扩基因最多的做过72度退火的，最低的42度，做TAIL-PCR最低用过25度
关键看你想要干什么

请问楼上这位仁兄，你tail-PCR的操作流程，能否给出一个实例或是实验记录的东东，不瞒你说我最近在研究这个东西
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-07-10 21:09:03
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