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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR最高的退火温度
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brassica227

铁虫 (小有名气)

[交流] PCR最高的退火温度

请问各位虫有，做PCR时最高的退火温度能达多少？可不可以超过65度
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1楼 2009-07-10 15:50:56
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hyf9901

铁杆木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-10 21:28
我扩基因最多的做过72度退火的，最低的42度，做TAIL-PCR最低用过25度
关键看你想要干什么
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滴自己的汗，吃自己的饭，自己的事情自己办，不抱怨，不诉苦，走一步，是一步，一路朝前不回头，死到哪站算哪站
9楼2009-07-10 20:14:30
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)
★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-10 21:28
那要看你引物的Tm值了，如果Tm值较高，那65度退火没有问题。总的来说，只要能保证引物同目的序列有效退火就行。合理的退火温度从50℃到70℃。
赞一下(7人) 回复此楼
2楼2009-07-10 15:56:42
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)
退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃
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3楼2009-07-10 15:57:36
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-10 21:28
是不是GC含量高导致Tm值高啊，这样的话可以用GC buffer。可以不必按照退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃原则，设计在60-62 之间或者再调整一下
赞一下(7人) 回复此楼
4楼2009-07-10 16:38:20
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