24小时热门版块排行榜    

查看: 2000  |  回复: 24
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

brassica227

铁虫 (小有名气)

[交流] PCR最高的退火温度

请问各位虫有,做PCR时最高的退火温度能达多少?可不可以超过65度
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyf9901

铁杆木虫 (著名写手)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-10 21:28
我扩基因最多的做过72度退火的,最低的42度,做TAIL-PCR最低用过25度
关键看你想要干什么
滴自己的汗,吃自己的饭,自己的事情自己办,不抱怨,不诉苦,走一步,是一步,一路朝前不回头,死到哪站算哪站
9楼2009-07-10 20:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

rainbamboo8707

金虫 (小有名气)

★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-10 21:28
那要看你引物的Tm值了,如果Tm值较高,那65度退火没有问题。总的来说,只要能保证引物同目的序列有效退火就行。合理的退火温度从50℃到70℃。
2楼2009-07-10 15:56:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainbamboo8707

金虫 (小有名气)

退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃
3楼2009-07-10 15:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihaoexe

银虫 (小有名气)

★ ★
brassica227(金币+1):thanks!
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-10 21:28
是不是GC含量高导致Tm值高啊,这样的话可以用GC buffer。可以不必按照退火温度一般设定比引物的Tm 低5℃原则,设计在60-62 之间或者再调整一下
4楼2009-07-10 16:38:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见