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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR最高的退火温度
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好的办法就是去试试。。。
呵呵。祝福LZ
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
11楼2009-07-10 21:34:15
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csjiang1123

木虫 (小有名气)
我做过60
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12楼2009-07-10 21:57:37
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
GC含量高的话 还是可以的 65℃我就做过啊
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Nevergiveup!
13楼2009-07-10 22:54:58
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aga0110125

银虫 (小有名气)
两步法就是把退火温度和延伸温度合并都用72C，不过我只是听说没用过
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14楼2009-07-11 14:43:07
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以的
比较极端的，对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法， 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。
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15楼2009-07-11 16:07:31
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-7-10 21:09:

请问楼上这位仁兄，你tail-PCR的操作流程，能否给出一个实例或是实验记录的东东，不瞒你说我最近在研究这个东西

是大姐啊,兄弟
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16楼2009-07-11 16:23:21
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ly888lsp

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你引物的Tm值了，如果Tm值较高，那65度退火没有问题。总的来说，只要能保证引物同目的序列有效退火就行。合理的退火温度从50℃到70℃
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17楼2009-07-15 15:13:33
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love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做过很多次，直接68度退火加延伸
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18楼2009-07-15 15:27:56
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fz-xyz

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做过70度的，发现没有什么问题。不过超过72度的延伸温度，貌似没大有道理
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追求科学
19楼2009-07-15 17:23:54
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luckydong1

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
65度应该问题不大，你先试试，而且温度高，特异性会更好
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20楼2009-07-15 18:34:53
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