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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 单抗用抗体需要做冻干处理吗？
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Thfinding

新虫 (初入文坛)

[求助] 单抗用抗体需要做冻干处理吗？ 已有1人参与

本人科研白一枚。最近在做单抗。在免疫小鼠这一步中，许多文献都给了精确的免疫用量，楼主最终确定了200μg，200μL/只的剂量。可遇到测蛋白浓度的问题。用BCA、BrandFord、Lowry和磺基水杨酸法测蛋白浓度都需要标准品，用OD测又不准。所以想用冻干法提纯出蛋白后再将蛋白溶解于生理盐水或PBS中。
问题来了：是否有必要将抗原冻干处理？如果不冻干，有没有其他方法可以精确测没有标准品的蛋白浓度？
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1楼 2020-05-16 20:19:14
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Thfinding at 2020-05-24 15:55:25
把抗原提纯之后用考染和WB检测一下。然后用超滤或者透析提纯。再后来就是我问的要不要做冻干了。因为目前我查到的免疫小鼠的资料都有明确的抗原浓度，而用上述方法又测不出浓度，就想要做冻干。没有经验，所以来小 ...

每种含量测定的方法确实有差别，只要免疫的蛋白量大于等于资料中说的就可以，个人觉得。也听别人说过的免疫的量小于我们常见的，这个还需要自己摸索。
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I am not a hero , but I served with heroes！
5楼2020-08-03 13:25:55
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kakaakaka

铁虫 (初入文坛)
请问楼主是怎么后来是怎么做的呢,刚刚开始做抗原不知道后面怎么处理了
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2楼2020-05-23 15:52:42
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Thfinding

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kakaakaka at 2020-05-23 15:52:42
请问楼主是怎么后来是怎么做的呢,刚刚开始做抗原不知道后面怎么处理了

把抗原提纯之后用考染和WB检测一下。然后用超滤或者透析提纯。再后来就是我问的要不要做冻干了。因为目前我查到的免疫小鼠的资料都有明确的抗原浓度，而用上述方法又测不出浓度，就想要做冻干。没有经验，所以来小木虫求高人指点了

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3楼2020-05-24 15:55:25
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buzhidaoren

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

即便测出精确的浓度实际意义也不太大，更多的是需要自己摸索免疫剂量
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4楼2020-06-30 13:55:44
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