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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主

[交流] SDS-PAGE制样问题

目的蛋白为分泌表达。
请问发酵液上清应该怎么制样?
菌体离心后,其上清可以直接加上样BUFFER煮吗?
有人说,上清液里含有很多离子和其他杂质 这个会影响跑胶吗?
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从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)

★ ★ ★
houjinglhy(金币+1,VIP+0): 7-6 23:05
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-7 08:15
最好对上清液进行进一步的纯化、除盐,不然其他物质、杂质离子很有可能对你的目的蛋白的电泳会造成影响,比如说如果杂质分质量过大可能会堵塞凝胶孔径,而影响蛋白质的分离;另一些杂质离子,会对电泳体系构成破会,而影响电泳结果
2楼2009-07-06 22:19:41
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)

祝实验顺利
3楼2009-07-06 22:20:33
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yang0071

木虫 (职业作家)


houjinglhy(金币+1,VIP+0): 7-6 23:05
先透析去除离子,再看情况进行蛋白质纯化 浓缩
4楼2009-07-06 23:02:38
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暖风1711

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同问,我跑的是乳酸菌分泌蛋白,祝试验顺利
5楼2009-07-06 23:13:08
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zplipeng

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有缓冲液应该没有问题的吧
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
6楼2009-07-06 23:22:14
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-7 08:16
取上清200 uL
加入5X Buffer 50 uL 然后 沸水浴 3min。

电泳加样10-20uL, 问题不大。

如果不行,就加5-10 uL,可以啦。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-07-07 03:05:33
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


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可以直接跑电泳,问题不大
如果蛋白浓度低,可以考虑TCA沉淀
8楼2009-07-07 07:59:38
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烟大考研

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-7 08:16
我做的发酵液电泳是离心除细胞后,分别取20uL发酵液上清,一个加20ul非还原Buffer,另一个加还原buffer,非还原的离心三分钟直接上样,还原的离心一分钟,沸水浴1分钟,再离心3分钟后上样,电泳结果出来不错。我的发酵液蛋白含量最高的在200ug左右。
心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
9楼2009-07-07 08:13:40
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xiaoyuyf

新虫 (初入文坛)


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也可以用超滤管浓缩下蛋白
10楼2009-07-07 10:12:56
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