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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE制样问题
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主

[交流] SDS-PAGE制样问题

目的蛋白为分泌表达。
请问发酵液上清应该怎么制样？
菌体离心后，其上清可以直接加上样BUFFER煮吗？
有人说，上清液里含有很多离子和其他杂质 这个会影响跑胶吗？
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
1楼 2009-07-06 22:08:37
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★
houjinglhy(金币+1,VIP+0): 7-6 23:05
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-7 08:15
最好对上清液进行进一步的纯化、除盐，不然其他物质、杂质离子很有可能对你的目的蛋白的电泳会造成影响，比如说如果杂质分质量过大可能会堵塞凝胶孔径，而影响蛋白质的分离；另一些杂质离子，会对电泳体系构成破会，而影响电泳结果
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2楼2009-07-06 22:19:41
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
祝实验顺利
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3楼2009-07-06 22:20:33
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0): 7-6 23:05
先透析去除离子，再看情况进行蛋白质纯化 浓缩
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4楼2009-07-06 23:02:38
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暖风1711

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同问，我跑的是乳酸菌分泌蛋白，祝试验顺利
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5楼2009-07-06 23:13:08
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有缓冲液应该没有问题的吧
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
6楼2009-07-06 23:22:14
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-7 08:16
取上清200 uL
加入5X Buffer 50 uL 然后 沸水浴 3min。

电泳加样10-20uL， 问题不大。

如果不行，就加5-10 uL，可以啦。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-07-07 03:05:33
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以直接跑电泳，问题不大
如果蛋白浓度低，可以考虑TCA沉淀
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8楼2009-07-07 07:59:38
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-7 08:16
我做的发酵液电泳是离心除细胞后，分别取20uL发酵液上清，一个加20ul非还原Buffer，另一个加还原buffer，非还原的离心三分钟直接上样，还原的离心一分钟，沸水浴1分钟，再离心3分钟后上样，电泳结果出来不错。我的发酵液蛋白含量最高的在200ug左右。
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
9楼2009-07-07 08:13:40
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xiaoyuyf

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
也可以用超滤管浓缩下蛋白
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10楼2009-07-07 10:12:56
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