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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE制样问题
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主

[交流] SDS-PAGE制样问题

目的蛋白为分泌表达。
请问发酵液上清应该怎么制样？
菌体离心后，其上清可以直接加上样BUFFER煮吗？
有人说，上清液里含有很多离子和其他杂质 这个会影响跑胶吗？
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
1楼 2009-07-06 22:08:37
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-7 08:16
我做的发酵液电泳是离心除细胞后，分别取20uL发酵液上清，一个加20ul非还原Buffer，另一个加还原buffer，非还原的离心三分钟直接上样，还原的离心一分钟，沸水浴1分钟，再离心3分钟后上样，电泳结果出来不错。我的发酵液蛋白含量最高的在200ug左右。
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
9楼2009-07-07 08:13:40
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★
houjinglhy(金币+1,VIP+0): 7-6 23:05
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-7 08:15
最好对上清液进行进一步的纯化、除盐，不然其他物质、杂质离子很有可能对你的目的蛋白的电泳会造成影响，比如说如果杂质分质量过大可能会堵塞凝胶孔径，而影响蛋白质的分离；另一些杂质离子，会对电泳体系构成破会，而影响电泳结果
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2楼2009-07-06 22:19:41
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
祝实验顺利
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3楼2009-07-06 22:20:33
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0): 7-6 23:05
先透析去除离子，再看情况进行蛋白质纯化 浓缩
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4楼2009-07-06 23:02:38
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