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yucca2081

铁虫 (小有名气)

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专业: 保护生物学与恢复生态学

[交流] 植物DNA提取如何让质量更好？

提取一种植物的总DNA：(1)电泳出来总是有很明显的托尾，疑是DNA已经剪切；(2)加样孔很亮；(3)DNA含量低；(4)检测分光光度比值不理想。

提取高手来说说应怎样改进？

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-5 at 20:57 ]

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1楼2009-07-05 16:34:58

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yucca2081

铁虫 (小有名气)

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★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):鼓励一下！ 7-8 22:41

具体步骤是这样的：
(1)称取0.05g硅胶干燥的叶片在磨样机中粉碎30s，加入1 ml冰里预冷的洗脱缓冲液(不含CTAB的抽提液)，离心。两次。
(2)加入750μl预热至65℃的CTAB抽提液，65℃水浴90min。期间每隔10-15 min上下颠倒几次eppendorf管。
(3)加入等体积(750μl)的氯仿一异戊醇(24:1)，离心。（3次）
(4)取上清加入4μl 10 mg/ml的RNaseA. 37℃水浴30min。
(5)取上清液加入2倍体积的冰异丙醇（-20℃），1/3体积5M NaCI溶液，-20℃冰箱静置2h。
(6)沉淀离心15min。将液体小心从eppendorf管中倒出，取DNA沉淀。
(7)70%乙醇离心。弃上清。重复一次。自然风干。
(8)加1×TE缓冲液，溶解DNA沉淀。