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yucca2081铁虫 (小有名气)
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植物DNA提取如何让质量更好？
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提取一种植物的总DNA：(1)电泳出来总是有很明显的托尾，疑是DNA已经剪切；(2)加样孔很亮；(3)DNA含量低；(4)检测分光光度比值不理想。 提取高手来说说应怎样改进？ [ Last edited by 350784478 on 2009-8-5 at 20:57 ] |
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2楼2009-07-05 16:42:30
herwan
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3楼2009-07-05 16:59:49
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4楼2009-07-05 22:34:44
yucca2081
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5楼2009-07-07 13:18:08
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具体步骤是这样的： (1)称取0.05g硅胶干燥的叶片在磨样机中粉碎30s，加入1 ml冰里预冷的洗脱缓冲液(不含CTAB的抽提液)，离心。两次。 (2)加入750μl预热至65℃的CTAB抽提液，65℃水浴90min。期间每隔10-15 min上下颠倒几次eppendorf管。 (3)加入等体积(750μl)的氯仿一异戊醇(24:1)，离心。（3次） (4)取上清加入4μl 10 mg/ml的RNaseA. 37℃水浴30min。 (5)取上清液加入2倍体积的冰异丙醇（-20℃），1/3体积5M NaCI溶液，-20℃冰箱静置2h。 (6)沉淀离心15min。将液体小心从eppendorf管中倒出，取DNA沉淀。 (7)70%乙醇离心。弃上清。重复一次。自然风干。 (8)加1×TE缓冲液，溶解DNA沉淀。 |
6楼2009-07-07 13:31:21
7楼2009-07-07 14:21:21
yucca2081
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