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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 植物DNA提取如何让质量更好？
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yucca2081

铁虫 (小有名气)

[交流] 植物DNA提取如何让质量更好？

提取一种植物的总DNA：(1)电泳出来总是有很明显的托尾，疑是DNA已经剪切；(2)加样孔很亮；(3)DNA含量低；(4)检测分光光度比值不理想。提取高手来说说应怎样改进？

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-5 at 20:57 ]
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1楼 2009-07-05 16:34:58
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weizhenlin

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先你的说明是什么植物，用的什么方法，别人才好理解。从你的结果看，多糖和蛋白含量很高。最好先把你的方法贴出来看看，大家在提建议。
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2楼2009-07-05 16:42:30
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herwan

木虫 (知名作家)

★游离希★
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-8 22:41
同意楼上的说法！
拖尾现象在提取DNA的时候恩容易出现
主要是由于操作上不当
研磨植物的时候没有保证持续的低温
最理想的状态应该是研磨完之后是一种干粉的状态
要是已经化了而粘到了离心管壁上，肯定拖尾！
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最让偶感动的一句话：“如果你愿意，你可以随时离开!"偶就这样被征服了~~~于是心中紧记“生死契阔，与子相悦；执子之手，与子偕老”！
3楼2009-07-05 16:59:49
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Lz说的不清楚啊。。。。。
同意1楼的说法啊
赞一下(1人) 回复此楼
加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
4楼2009-07-05 22:34:44
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yucca2081

铁虫 (小有名气)
谢谢几个楼上朋友。我提取的是裸子植物柳杉DNA，CTAB方法，氯仿异戊纯抽提蛋白质。
托尾现象3楼说的极是，但提取干燥样品时是用磨样机打碎，期间都是粉末状，同样也有托尾？
另外，如果粘到壁上有托尾是什么原因造成的呢？
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5楼2009-07-07 13:18:08
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yucca2081

铁虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):鼓励一下！ 7-8 22:41
具体步骤是这样的：
    (1)称取0.05g硅胶干燥的叶片在磨样机中粉碎30s，加入1 ml冰里预冷的洗脱缓冲液(不含CTAB的抽提液)，离心。两次。
    (2)加入750μl预热至65℃的CTAB抽提液，65℃水浴90min。期间每隔10-15 min上下颠倒几次eppendorf管。
    (3)加入等体积(750μl)的氯仿一异戊醇(24:1)，离心。（3次）
    (4)取上清加入4μl 10 mg/ml的RNaseA. 37℃水浴30min。
    (5)取上清液加入2倍体积的冰异丙醇（-20℃），1/3体积5M NaCI溶液，-20℃冰箱静置2h。
    (6)沉淀离心15min。将液体小心从eppendorf管中倒出，取DNA沉淀。
    (7)70%乙醇离心。弃上清。重复一次。自然风干。
    (8)加1×TE缓冲液，溶解DNA沉淀。
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6楼2009-07-07 13:31:21
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momoofo

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
推荐用酚：氯仿1：1洗一次 效果会好不少
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7楼2009-07-07 14:21:21
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yucca2081

铁虫 (小有名气)
谢谢momoofo!
使用酚－氯仿洗还需要氯仿－异戊醇洗吗？
如果需要，酚－氯仿是在其之前还是之后？请明示
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8楼2009-07-07 16:47:19
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figo.339

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
点样孔很亮说明蛋白很多，你应该好好抽提一下。蛋白拖尾一般都是糖较多。
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9楼2009-07-08 09:11:14
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yucca2081

铁虫 (小有名气)
曾经试过抽提5次，上清剩的聊聊无几，但点样孔仍然很亮
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10楼2009-07-08 15:26:44
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