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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » DNA解旋酶与DNA的结合检测（gel-PAGE与EMSA结果矛盾）
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scxryu

木虫 (小有名气)

[交流] DNA解旋酶与DNA的结合检测（gel-PAGE与EMSA结果矛盾）

请问有人做过DNA解旋酶和DNA结合相关的实验吗？
我最近将DNA解旋酶和单链DNA孵育后，用琼脂糖凝胶电泳检测，确实是有结合的：结合后的有条带，与对照组的单链DNA条件相差大约100bp大小，区分度很好。
但是用EMSA跑胶，只有单链DNA的条带，却没有结合的条带，请问可能是什么原因？（染蛋白也是没有条带的）
EMSA用的试剂为thermo Fisher购买的Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) Kit (E33075)；即用sybr green染的DNA，用SYPRO染的蛋白。我的配胶是用的6%的非变性胶，实验过程该试剂盒参照说明书进行。
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1楼 2020-03-18 15:09:17
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scxryu

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by pennchem at 2020-03-19 08:36:17
琼脂糖和PAGE的孔径不一样？


Helicase有单条肽的，但是很多replicative的helicase是hexamer，可能分子量太大，跑不进去？

是的，孔径肯定是琼脂糖的大一些。这个问题我也在考虑
赞一下 回复此楼
13楼2020-03-20 14:44:18
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
scxryu(金币+1): 谢谢参与
琼脂糖和PAGE的孔径不一样？


Helicase有单条肽的，但是很多replicative的helicase是hexamer，可能分子量太大，跑不进去？
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scxryu
11楼2020-03-19 08:36:17
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danghaha3楼
2020-03-18 17:37   回复  
scxryu(金币+1): 谢谢参与
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hbabc4楼
2020-03-18 17:54   回复  
scxryu(金币+1): 谢谢参与
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080222156楼
2020-03-18 20:11   回复  
scxryu(金币+1): 谢谢参与
好 发自小木虫Android客户端
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