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scxryu

木虫 (小有名气)


[交流] DNA解旋酶与DNA的结合检测(gel-PAGE与EMSA结果矛盾)

请问有人做过DNA解旋酶和DNA结合相关的实验吗?
我最近将DNA解旋酶和单链DNA孵育后,用琼脂糖凝胶电泳检测,确实是有结合的:结合后的有条带,与对照组的单链DNA条件相差大约100bp大小,区分度很好。
但是用EMSA跑胶,只有单链DNA的条带,却没有结合的条带,请问可能是什么原因?(染蛋白也是没有条带的)
EMSA用的试剂为thermo Fisher购买的Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) Kit (E33075);即用sybr green染的DNA,用SYPRO染的蛋白。我的配胶是用的6%的非变性胶,实验过程该试剂盒参照说明书进行。
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琼脂糖和PAGE的孔径不一样?


Helicase有单条肽的,但是很多replicative的helicase是hexamer,可能分子量太大,跑不进去?

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11楼2020-03-19 08:36:17
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scxryu

木虫 (小有名气)


送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by pennchem at 2020-03-19 08:36:17
琼脂糖和PAGE的孔径不一样?


Helicase有单条肽的,但是很多replicative的helicase是hexamer,可能分子量太大,跑不进去?

是的,孔径肯定是琼脂糖的大一些。这个问题我也在考虑
13楼2020-03-20 14:44:18
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danghaha3楼
2020-03-18 17:37   回复  
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hbabc4楼
2020-03-18 17:54   回复  
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080222156楼
2020-03-18 20:11   回复  
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