应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA解旋酶与DNA的结合检测求助
51/1返回列表
查看: 944  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

scxryu

木虫 (小有名气)

[求助] DNA解旋酶与DNA的结合检测求助 已有1人参与

各位老师，我最近用DNA解旋酶与单链DNA孵育，然后用琼脂糖凝胶电泳检测，有目的条带，比单独的单链DNA（50nt大小）会大一些，在200nt的位置。
但是，紧接着用单链DNA和双链DNA的杂合体（包含50nt和20bp区域）实验，琼脂糖电泳却没有目的条带，只有跟对照组一样大小的条带，条带在80nt附近。
是解旋酶无法结合到我的ssDNA-dsDNA的杂合体上吗？
孵育缓冲液用的是：50mM HEPES pH 8, 100mM乙酸钾，1mM EDTA。暂时还没有加入ATP和Mg2+，只是检测是否能结合。
回复此楼

» 猜你喜欢
Spring_HF
1楼 2020-03-02 14:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
50bp/20bp的位置在哪里？ 有没有可能单独结合了50bp的单链？
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

scxryu
行至水穷处，坐看云起时
2楼2020-03-03 08:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scxryu

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2020-03-03 08:34:41
50bp/20bp的位置在哪里？ 有没有可能单独结合了50bp的单链？

在80nt附近，加酶的实验组和不加酶的对照组都只有这个带。
赞一下 回复此楼
Spring_HF
3楼2020-03-03 17:25:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

盐离子浓度可以降低至30，50mM,

20bp/50bp duplex有经过纯化吗，多出的单链可以让结果难以解释

20bp/50bp的话，单链30bp会是更好的对照

解旋酶是5'--->3'还是 3'--->5'？

酶的核酸除得干净吗？
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

scxryu
行至水穷处，坐看云起时
4楼2020-03-04 08:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scxryu

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2020-03-04 08:34:04
盐离子浓度可以降低至30，50mM,

20bp/50bp duplex有经过纯化吗，多出的单链可以让结果难以解释

20bp/50bp的话，单链30bp会是更好的对照

解旋酶是5'--->3'还是 3'--->5'？

酶的核酸除得干

酶是5'-3'，里面的核酸确实是除去的，结合单链DNA的时候，也没有出现杂带。50nt-20bp的杂合体是用70nt的单链和20nt的单链退火形成的，然后做胶回收纯化的，应该没问题。我去试试把盐离子浓度降低试试，谢谢大佬。
赞一下 回复此楼
Spring_HF
5楼2020-03-04 08:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 scxryu 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎211本科同学，过A区国家线，A区非偏远一本，交叉学科课题组 +23 lisimayy 2026-03-04 37/1850 2026-03-10 18:10 by a1763909
[考研] 0817学硕华东区求调剂 +3 30660438 2026-03-08 3/150 2026-03-10 16:55 by Pegasus0429
[考研] 求调剂 +4 yfihxh 2026-03-09 4/200 2026-03-10 16:50 by Pegasus0429
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +3 18266118446 2026-03-09 3/150 2026-03-10 15:50 by houyaoxu
[考研] 求调剂！ +3 朔朔话 2026-03-09 3/150 2026-03-10 15:48 by houyaoxu
[考研] 求调剂 一志愿苏州大学，0856化工323分 | 本科应化 | 有专利/竞赛/科研助手经历 | +7 橙子cyx 2026-03-06 9/450 2026-03-10 12:03 by kiokin
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +6 每天散步 2026-03-09 7/350 2026-03-10 10:52 by 星空星月
[考研] 环境调剂 +5 晓看天暮看云 2026-03-09 5/250 2026-03-10 10:46 by 星空星月
[考研] 新疆大学地质与矿业工程学院招生 +24 another12 2026-03-04 32/1600 2026-03-10 01:15 by 1111--
[考研] 320材料与化工，求调剂 +11 鹤遨予卿 2026-03-04 13/650 2026-03-09 19:39 by 30660438
[考博] 26年博士申请 +4 科研狗111 2026-03-07 4/200 2026-03-08 21:56 by 0611517sll
[考研] 招调剂 +20 帆船哥 2026-03-04 23/1150 2026-03-08 16:25 by taycat
[考研] 材料科学（0805）338 求调剂 +7 xiaokang3286 2026-03-07 7/350 2026-03-08 03:42 by lfhuang
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学0856材料与化工，前三科206，总分283，求调剂 +7 26考研求调剂 2026-03-06 7/350 2026-03-07 14:49 by Miko19
[考研] 求调剂 +4 呼呼？~+123456 2026-03-05 5/250 2026-03-06 23:15 by L135790
[考研] 求调剂 +4 呼呼？~+123456 2026-03-06 4/200 2026-03-06 23:11 by L135790
[考研] 一志愿中石油，化学工程，301求调剂 +4 豚馒枳枳 2026-03-04 4/200 2026-03-06 22:15 by 星空星月
[考研] 275求调剂 +4 大爆炸难民 2026-03-06 5/250 2026-03-06 09:21 by guoweigw
[考研] 271求调剂 +7 月色c 2026-03-05 8/400 2026-03-05 19:51 by wangjihu
[考研] 一志愿西交化工专硕288专业课93求调剂 +6 好运好运接接 2026-03-04 6/300 2026-03-05 09:36 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭