应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA解旋酶与DNA的结合检测求助
51/1返回列表
查看: 1142  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

scxryu

木虫 (小有名气)

[求助] DNA解旋酶与DNA的结合检测求助 已有1人参与

各位老师，我最近用DNA解旋酶与单链DNA孵育，然后用琼脂糖凝胶电泳检测，有目的条带，比单独的单链DNA（50nt大小）会大一些，在200nt的位置。
但是，紧接着用单链DNA和双链DNA的杂合体（包含50nt和20bp区域）实验，琼脂糖电泳却没有目的条带，只有跟对照组一样大小的条带，条带在80nt附近。
是解旋酶无法结合到我的ssDNA-dsDNA的杂合体上吗？
孵育缓冲液用的是：50mM HEPES pH 8, 100mM乙酸钾，1mM EDTA。暂时还没有加入ATP和Mg2+，只是检测是否能结合。
回复此楼

» 猜你喜欢
Spring_HF
1楼 2020-03-02 14:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
50bp/20bp的位置在哪里？ 有没有可能单独结合了50bp的单链？
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

scxryu
行至水穷处，坐看云起时
2楼2020-03-03 08:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scxryu

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2020-03-03 08:34:41
50bp/20bp的位置在哪里？ 有没有可能单独结合了50bp的单链？

在80nt附近，加酶的实验组和不加酶的对照组都只有这个带。
赞一下 回复此楼
Spring_HF
3楼2020-03-03 17:25:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

盐离子浓度可以降低至30，50mM,

20bp/50bp duplex有经过纯化吗，多出的单链可以让结果难以解释

20bp/50bp的话，单链30bp会是更好的对照

解旋酶是5'--->3'还是 3'--->5'？

酶的核酸除得干净吗？
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

scxryu
行至水穷处，坐看云起时
4楼2020-03-04 08:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scxryu

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2020-03-04 08:34:04
盐离子浓度可以降低至30，50mM,

20bp/50bp duplex有经过纯化吗，多出的单链可以让结果难以解释

20bp/50bp的话，单链30bp会是更好的对照

解旋酶是5'--->3'还是 3'--->5'？

酶的核酸除得干

酶是5'-3'，里面的核酸确实是除去的，结合单链DNA的时候，也没有出现杂带。50nt-20bp的杂合体是用70nt的单链和20nt的单链退火形成的，然后做胶回收纯化的，应该没问题。我去试试把盐离子浓度降低试试，谢谢大佬。
赞一下 回复此楼
Spring_HF
5楼2020-03-04 08:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 scxryu 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-10-03 09:46 by Equinoxhua
[教师之家] 寻找合作团队 +3 悠悠2003 2026-10-01 3/150 2026-10-03 09:08 by flfgenius
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-10-03 08:49 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-10-02 23:12 by Equinoxhua
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-10-01 21:59 by Equinoxhua
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-10-01 21:07 by Equinoxhua
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 8/400 2026-10-01 19:08 by Equinoxhua
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:13 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭