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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菌液PCR与普通PCR有啥区别！
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 菌液PCR与普通PCR有啥区别！

请问各位虫友菌液PCR与普通PCR在操作时有什么区别吗？！有啥需要特别注意的吗？
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
1楼 2009-06-25 08:49:57
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果是阳性菌的话，菌液PCR之前最好先煮沸5-10min，阴性菌直接把菌悬液当模板加就可以了，可以适当延长预变性时间
菌液PCR杂质会较多，产物检测时可能会有RNA和蛋白，如果要回收产物的话最好低电压跑长胶……
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9楼2009-06-27 08:58:49
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孔乙己

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没什么区别，就是模板不同，普通PCR以纯化后的DNA为模板，菌落PCR也菌为模板，PCR是菌液PCR的变性时间应略长于普通PCR。呵呵，你是不是在做阳性克隆鉴定啊？
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愿大家共同进步
2楼2009-06-25 08:58:50
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一个是加煮沸的菌液 一个是加纯DNA模板
菌液PCR不是很可靠， 一般筛选的时候用
并且可能有非特异性扩增（假阳性），而且有个时候明明有 就是P不出来
所以  一般我筛选也尽量不用菌液PCR
菌液PCR最大的优点当然是省时省事咯
注意菌液PCR作模版的时候 加量币普通PCR要多点 因为模版浓度太低
一般3-5微升（50微升体系）
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
3楼2009-06-25 09:00:44
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wzhzhc

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在第一步变性的时候时间稍长，例如4 min 左右。
接下来的循环 按正常的设置就可以了。
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4楼2009-06-25 09:02:05
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